[發(fā)明專(zhuān)利]基于核酸適配體和錳卟啉催化的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510063506.1
• 申請(qǐng)日: 2015-02-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104634775B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于聰;李文英;張青峰;陳健;周會(huì)鵬;李永新
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/76
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/76;C07D487/22
• 代理公司: 長(zhǎng)春菁華專(zhuān)利商標(biāo)代理事務(wù)所(普通合伙)22210
• 代理人: 南小平

1.一種基于核酸適配體和錳卟啉催化的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備錳卟啉探針

在50mL的容量瓶中加入5,10,15,20-四(1-甲基-4-吡啶基)卟啉101mg，MnCl₂·4H₂O 16mg，將其溶解于10mL甲醇中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流進(jìn)行配位反應(yīng)，配位反應(yīng)完成后用氯離子交換樹(shù)脂交換24小時(shí)，然后用乙酸乙酯沉淀，過(guò)濾，得到的紫黑色固體在真空烘箱中烘干，制備得到錳卟啉探針；合成路線如下：

(2)蛋白質(zhì)檢測(cè)

向化學(xué)反應(yīng)器中加入20mM Tris-HCl，25μM魯米諾和0.05％Triton X-100，再加入錳卟啉探針，最后加入包含核酸適配體和待測(cè)蛋白質(zhì)的溶液；

將所述化學(xué)反應(yīng)器放入化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器中，最后用微量進(jìn)樣器加入濃度為100mM的H₂O₂，記錄化學(xué)發(fā)光隨時(shí)間的變化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸適配體的堿基濃度為12.5μM。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述錳卟啉探針的濃度為5μM。