[發明專利]采集豬腦垂體及下丘腦的方法

在審

• 申請號: 201510063062.1
• 申請日: 2015-02-08
• 公開（公告）號: CN104655449A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發明（設計）人: 陳祥;馮文武;龍威海;許厚強;李鵬程;孫振梅;丁玫;陳偉
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: G01N1/04
• 分類號: G01N1/04;G01N1/10
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 李亮;程新敏

技術領域

本發明涉及生命科學領域，尤其是一種采集豬腦垂體及下丘腦的方法。

背景技術

腦垂體是機體最重要的內分泌腺，它分泌多種激素對機體代謝、生長、發育和生殖等有重要作用；下丘腦是大腦皮層下調節內臟活動的高級中樞，調節著體溫、攝食、水平衡、血糖和內分泌腺活動等重要的生理功能；采集完整無污染的腦垂體及下丘腦，進行總RNA提取，對其后續研究有著至關重要的意義。

現有的豬腦部組織樣品的采集方法，特別是對豬腦垂體及下丘腦的采集方法，主要是用電鋸或斧頭等縱向劈開頭顱為平均的兩部分，在劈開部分內，尋找腦部組織如腦垂體、下丘腦等。此方法所獲得的腦垂體及下丘腦由于受到機械損傷較大，收集到的腦垂體及下丘腦完整性較差，且劈半過程中極易將腦部組織混雜（如大腦、下丘腦、小腦、腦垂體等易碎組織），在劈半中尋找樣本由于耗時較長，樣本長時間暴露于空氣中導致污染嚴重，對于如提取腦部組織RNA進行后續試驗等研究有著毀滅性的污染。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種采集豬腦垂體及下丘腦的方法，它采集效率高、完整性好、較低污染、易于操作，以克服現有技術的不足。

本發明是這樣實現的：采集豬腦垂體及下丘腦的方法，包括如下步驟：

1）取已屠宰的豬頭部，用手術刀在垂直于鼻骨方向的頂骨位置，在距離枕髁4-6cm處沿頭部環切皮膚，暴露頭骨；

2）用電鋸或斧頭沿手術刀開口橫向劈開豬的頭骨，劈入骨頭1.5-2.5cm，并能看見頭內腦組織；再沿劈口將兩邊的骨頭劈開，將劈開的部分分離，直接暴露腦部組織；

3）用眼科鑷撥開小腦，暴露腦干與大腦結合處，使豬腦垂體及下丘腦可見；

4）用眼科剪沿腦垂體與漏斗的相連處剪下，即得到完整豬腦垂體；再用眼科剪沿根部剪取下丘腦。

將取下的腦垂體或下丘腦用DEPC處理水洗滌后，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存；或在洗滌后用裝有RNA保存液的EP管盛裝后立即放入冰盒。

與現有技術相比，本發明能快速將豬頭骨劈開后獲得完整、較低污染的腦垂體及下丘腦組織樣本，保證了腦部組織樣本的采集效率，且克服了現有技術中腦垂體及下丘腦等組織污染程度高、較易丟失等缺陷，并適用于大量樣本采集，且操作簡單快捷。本發明方法簡單，使用效果好。

附圖說明

附圖1為本發明的切口位置示意圖；

附圖1中：1-頂骨、2-枕骨、3-枕骨髁、4-下頜骨、5?-額骨、6?-上頜骨、7-切齒骨；

附圖2為為不同方法方法采集豬腦部組織后提取總RNA差異圖；

附圖2中：1、2-本發明的實施例采集的豬腦部垂體提總RNA；3、4-本發明的實施例采集的豬下丘腦提總RNA；?5、6-現有技術采集的豬腦部垂體提總RNA；7、8-現有技術采集的豬下丘腦提總RNA。

具體實施方式

本發明的實施例：采集豬腦垂體及下丘腦的方法，包括如下步驟：

1）取已屠宰的豬頭部，用手術刀在垂直于鼻骨方向的頂骨位置，在距離枕髁5cm處沿頭部環切皮膚，暴露頭骨；

2）用電鋸或斧頭沿手術刀開口橫向劈開豬的頭骨，劈入骨頭1.5-2.5cm，并能看見頭內腦組織；再沿劈口將兩邊的骨頭劈開，將劈開的部分分離，直接暴露腦部組織；

2）再沿劈口將兩邊的骨頭劈開，將劈開的部分分離，直接暴露腦部組織，可見被腦膜包裹的腦組織；

3）用無菌的眼科鑷及眼科剪剪開腦膜，暴露大腦與小腦；

4）用無菌的眼科剪剪取適量大腦，用DEPC處理水沖洗凈大腦后，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存；

5）再用無菌的眼科剪剪取適量小腦，用DEPC處理水沖洗凈小腦后，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存；

5）手握山豬頭，以枕髁與鼻骨為軸線，將山豬頭部旋轉180°，然后用眼科鑷撥開小腦，暴露腦干與大腦結合處，此時可以看見豬腦垂體及下丘腦，豬腦垂體形似小麥，借漏斗連于下丘腦；

6）用無菌的眼科剪沿腦垂體與漏斗相連處剪下，即得到完整豬腦垂體，用DEPC處理水洗滌腦垂體后，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存；

7）與豬腦垂體相連的下丘腦形似相連的凸起，用眼科剪沿根部剪取下丘腦后，用DEPC處理水洗滌腦垂體，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存。

將實施例采集豬的腦垂體及下丘腦與現有技術采集的分別進行總RNA的試劑盒法提取，操作參照Invitrogen公司的TRIZOL^??Reagent試劑盒說明書進行，提取后對所提RNA進行完整性檢測對比，對比結果顯示如圖2所示，采用實施例的方案采集豬腦垂體及下丘腦所提總RNA完整性與現有技術采集的相比，其污染程度顯著降低。