[發明專利]泡囊草抗腫瘤提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法

在審

• 申請號: 201510058746.2
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN104666595A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 熱娜·卡斯木;王金輝;黃健;李國玉;趙玉倩;李敏;馬慶東;張珂
• 申請（專利權）人: 新疆醫科大學
• 主分類號: A61K36/81
• 分類號: A61K36/81;A61P35/00
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔

技術領域

本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種哈薩克藥泡囊草抗腫瘤提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法以及其在在制備預防及治療肝癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌、腦膠質瘤等惡性腫瘤藥物中的應用。

背景技術

本品為茄科泡囊草屬植物泡囊草的根及根莖或全草。拉丁名：Physochlaina?physaloides?(L.)G.?Don.，分布于阿爾泰山，天山東部及中部山地草原，林原。產阿勒泰地區。多年生草本，高30-50cm，根狀莖可發出一至數莖。葉卵形，頂端急尖，基部寬楔形，全緣。花序為傘形或聚傘花序；花冠漏斗狀，紫色，筒部色淡，花柱顯著伸出花冠。蒴果。種子扁腎形，黃色?；ㄆ?-5月，果期5-7月。初夏植物生長繁茂期采全草，陰干。地上部枯萎期挖根，去凈泥土、曬干。

本品氣微，味微苦。鎮痛，鎮靜。主治治勞傷、心慌不安。全草可消毒劑。根作瀉劑并治皮膚病，花和莖可作止血劑。

本發明通過系統地篩選研究，意外地發現泡囊草提取物具有顯著抗腫瘤活性，即泡囊草提取物對腦膠質瘤、乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌等惡性腫瘤的具有很好的預防及治療作用。該活性提取物及其組合物有望應用到多種癌癥的預防和治療上。

發明內容

本發明所解決的技術問題是提供一種泡囊草提取物。

本發明還提供了以泡囊草提取物為主要活性成分的組合物。

本發明同時提供了泡囊草提取物及其組合物的制備和應用。

本發明是通過如下技術方案實現的：

哈薩克藥泡囊草經水超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫（二氯甲烷：甲醇，比例見表1），各二氯甲烷：甲醇比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫瘤活性，意外地發現先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:00，體積比）洗脫，繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:10，體積比）洗脫，洗脫得到的二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇=100:10，體積比）洗脫液經回收溶劑，干燥，即為抗腫瘤活性提取物，而其他比例的洗脫部位，沒有抗腫瘤活性。特別地，優選為先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:00，體積比）洗脫10倍柱體積，繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:10，體積比）洗脫15倍柱體積，洗脫液干燥后即為本發明抗腫瘤活性的化合物?？鼓[瘤活性的化合物可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該活性提取物從未見文獻報道，其TLC分析表征如圖1，TLC分析條件為：GF₂₅₄硅膠板，展開系統：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1?顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。

具體，發現過程如下：

1、泡囊草經水超聲提取物的制備

取哈薩克藥泡囊草20?g，經100?ml水超聲提取15?min，提取液濃縮后，得提取物SN0242B，樣品0.7163?g，留樣0.0399?g，二氯甲烷-甲醇系統洗脫。

2、二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫方法和結果

取哈薩克藥泡囊草20?g，經100?ml水超聲提取15?min，提取液濃縮后，得提取物SN0242B，樣品0.7163?g，留樣0.0399?g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅膠色譜，甲醇溶解，拌樣硅膠2.5?g，空白硅膠10?g，玻璃柱內徑2.0?cm，二氯甲烷-甲醇系統洗脫（條件見表1），柱體積22?ml，每個梯度洗脫200?ml，得到，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，二氯甲烷：甲醇梯度洗脫提取物，收率見表1，TLC分析結果見圖2，TLC分析條件為：GF₂₅₄硅膠板，展開系統：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1?顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。

表1

3、抗腫瘤活性篩選方法和結果

1）實驗條件

a)?細胞株信息

大鼠腦膠質瘤細胞株C6細胞購于中國典型培養物保藏中心細胞庫。

b)?藥品及試劑

樣品無菌條件下，DMSO?溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時用RPMI-1640?培養液稀釋至所需濃度（DMSO≤1?‰）。

RPMI?Medium?1640培養基干粉購于美國GIBCO公司。胎牛血清購于北京元亨圣馬生物技術研究所。Trypsin?1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽（MTT）。

c)?儀器