[發明專利]毛訶子肉丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法

在審

• 申請號: 201510058730.1
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN104644704A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發明（設計）人: 王金輝;熱娜·卡斯木;黃健;李國玉;吳文熙;王新玲;馬慶東;張珂
• 申請（專利權）人: 新疆醫科大學
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61P25/28;G01N30/90
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔

技術領域

本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種毛訶子肉丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法以及它在治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫藥用途。

背景技術

毛訶子肉為使君子科植物毛訶子（Terminalia?bellirica?Roxb）的干燥果實，毛訶子為落葉喬木，高12-15?m，胸徑可達1?m，枝灰色，具縱紋，小枝幼葉及葉柄基部常具銹色絨毛。葉螺旋狀集生枝頂，葉柄長3-9?cm，無毛，穗狀花序腋生。秋冬季果實成熟時采摘，曬干。我國生產于云南南部、新疆，國外分布于越南、老撾、泰國等。

毛訶子果實生干生寒、純化異常血液質和清除燒焦體液，止瀉固澀，補腦，明目、滋補腸胃，散氣消痣。主治濕熱性或血液質疾病，如胃腸原性腹瀉，腸內燒焦體液增多，腦虛視弱，迎風流淚，腸胃虛弱，氣結痔瘡等。現代藥理研究表明，毛訶子果實能促進膽汁分泌，使膽汁內總固體含量有明顯的增加，且小鼠口服醇提取對的LD₅₀為4.25?mg/kg。

在高通量篩選的過程中，本發明意外地發現大葉毛訶子肉具有很好的抑制丁酰膽堿酯酶的活性，該活性提取物及其組合物有望應用于治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫藥用途。

發明內容

本發明所解決的技術問題是提供一種毛訶子肉提取物。

本發明還提供了以毛訶子肉提取物為主要活性成分的組合物。

本發明同時提供了毛訶子肉提取物及其組合物的制備和應用。

本發明是通過如下技術方案實現的：

維吾爾藥毛訶子肉經甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，用石氯仿-甲醇混合溶劑梯度洗脫（氯仿-甲醇，比例見表1），各氯仿-甲醇比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其丁酰膽堿酯酶抑制活性，意外地發現先用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿：甲醇，100:1，體積比）洗脫，繼用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿：甲醇，100:6，體積比）洗脫得到的氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿：甲醇，100:6，體積比）洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有丁酰膽堿酯酶抑制活性的作用。特別地，優選為先用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿-甲醇，100:1，體積比）洗脫25倍柱體積，繼用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿-甲醇，100:6，體積比）洗脫20倍柱體積，洗脫液干燥后即為本發明丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物。丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物可以通過以上方法得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該毛訶子肉丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見文獻報道，其薄層色譜（TLC）分析結果見圖1，TLC分析條件：GF₂₅₄硅膠板，展開系統：氯仿：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1）顯色方法：香草醛-硫酸顯色。

具體，發現過程如下：

1、毛訶子肉經甲醇超聲提取物的制備

取維吾爾藥毛訶子肉20?g，經100?mL甲醇超聲提取15?min，提取液濃縮后，得提取物SN0047?樣品7.0540?g，留樣4.2032?g，上柱2.8508?g，拌樣硅膠3?g，空白硅膠10g，氯仿-甲醇系統。

2、氯仿-甲醇混合溶劑梯度洗脫方法和結果

取維吾爾藥毛訶子肉20?g，經100?mL甲醇超聲提取15?min，提取液濃縮后，得提取物SN0047?樣品7.0540?g，留樣4.2032?g，上柱2.8508?g，甲醇溶解，共用甲醇15?mL。上硅膠柱色譜，拌樣硅膠3?g，空白硅膠10?g，玻璃柱內徑1.6cm，氯仿-甲醇系統梯度洗脫（條件見表1），柱體積22?mL，每個梯度洗脫200mL，得到，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石油醚：丙酮梯度洗脫提取物，TLC分析結果見圖2，圖3，TLC分析條件：GF₂₅₄硅膠板，展開系統：氯仿：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1），氯仿：乙酸乙酯：甲醇（1:1:1），顯色方法：香草醛-硫酸顯色。

表1

3、抑制丁酰膽堿酯酶活性篩選方法和結果

1)????????實驗條件

a、材料：DMSO(二甲基亞砜)?(科密歐公司)；KH₂PO₄、K₂HPO₄·3H₂O(廣東汕頭市西隴化工廠)；BuChE酶(美國Sigma公司)；PNPG(美國Sigma公司)