[發明專利]一種包含豬流行性腹瀉病毒S499-650基因的重組沙門氏菌

在審

• 申請號: 201510058690.0
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN104630240A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 文翼平;黃小波;梁恩濤;文心田;曹三杰;伍銳;陳杰;張雨迪;段素芬;朱書權
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N15/50
• 分類號: C12N15/50;C12N15/70;C12N15/74;C12N1/21;C07K14/165;C12R1/19;C12R1/42
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙)51222
• 代理人: 李高峽;張娟

技術領域

本發明涉及基因工程領域，具體涉及一種包含豬流行性腹瀉病毒S_499-650基因重組沙門氏菌。

背景技術

豬流行性腹瀉病毒為豬流行性腹瀉疾病(Porcine?epidemic?diarrhea，PED)的病原，該病以產房1-7日齡仔豬淡黃色水樣腹瀉、嚴重脫水為主，剖檢可見仔豬腸道內脹氣、有黃色乳凝塊。PEDV主要通過糞-口途徑傳播，產房仔豬通過消化道攝入病毒后，病毒主要入侵空腸和回腸部位小腸黏膜上皮細胞，并開始病毒復制。PEDV的感染導致上皮細胞膜表面的雙糖酶(乳糖酶、蔗糖酶、麥芽糖酶)、氨肽酶、堿性磷酸酶的活性下降；同時，腸絨毛上皮細胞正常結構破壞并發生細胞破碎，造成腸絨毛萎縮，腸道表面積減少，從而導致小腸消化不良、吸收不良等機能障礙，誘發仔豬發生腹瀉并脫水。

PEDV最早在英國發現，并流行于歐洲從上世紀八十年代以后，中國、日本、韓國也開始有所報導。2010年至今，該病已廣泛流行于中國、韓國、泰國、美國等國。該病對產房仔豬極高的發病率和致死率、較高的治療成本及防控成本，以及病毒基因發生變異造成強毒株的出現，對世界養豬業造成了巨大的損失。

隨著PEDV分子生物學研究的深入，PEDV免疫機理基本清楚，屬于典型的局部黏膜免疫為主，存在于血清中PEDV?IgG不能提供有效保護，而腸道黏膜免疫所產生的分泌型抗體(SIgA)才能抵抗PEDV感染，仔豬通過初乳來獲得母源SIgA，從而產生對流行性腹瀉的被動免疫保護。

目前大多都是傳統型滅活苗和弱毒苗，但是它存在毒力返強及散毒的風險，需要改進。為了研制出更為安全、高效、成本低廉、保存和使用方法簡易的豬流行性腹瀉疫苗，人們開始利用基因工程手段開發黏膜免疫疫苗，以期達到進一步預防和控制該病的目的。如，徐麗麗等構建了可表達PEDV?S蛋白COE區域、SD區域的減毒沙門氏菌重組疫苗，其包含的抗原基因長，菌株穩定性越差，同時其包含crp毒力基因，安全性難以保證。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種新的重組沙門氏菌。

本發明提供了一種如SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。

本發明提供了一種如SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。

本發明重組載體，包含SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。優選地，所述的重組載體是重組pVAX1。

本發明重組菌，其特征在于：它包含權利要求2或者3所述的重組載體。

所述的重組菌為重組沙門氏菌或者重組大腸桿菌。

所述的重組沙門氏菌為重組減毒沙門氏菌SL7207。

本發明還提供了一種重組蛋白，它是由SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列編碼。它的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

PEDV?S_499-650核苷酸序列(SEQ?ID?NO：1)：

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對應的S_499-650氨基酸序列(SEQ?ID?NO：2)：