[發明專利]一種磁性熒光復合納米生物探針及其制備方法

有效

• 申請號: 201510052196.3
• 申請日: 2015-01-30
• 公開（公告）號: CN104762085B
• 公開（公告）日: 2018-02-06
• 發明（設計）人: 劉福田;丁永玲;孫康寧;綦育仕;閆君
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: C09K11/88
• 分類號: C09K11/88;B82Y30/00;B82Y20/00;B82Y25/00;G01N21/64;C07K1/13;C07K1/14;C12N15/10;C12N9/00
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1.一種磁性熒光復合納米微球的制備方法，其特征在于，該復合納米微球是以天然有機高分子為基體，通過在交聯劑的交聯作用將羧甲基殼聚糖修飾的磁性納米顆粒和水溶性量子點連接得到，所述熒光量子點分布在磁性納米顆粒的表面，其中磁性納米顆粒的粒徑大小在10-200nm，量子點的粒徑在1.5-10nm；

所述的制備方法包括以下步驟：

(a)采用共混包埋法制備羧甲基殼聚糖磁性納米復合物CMCH-MNPs：①稱取50-500mg磁性納米顆粒溶于30mL pH＝7.4，濃度為0.01mol/L的PBS緩沖溶液中，通氮氣去氧，利用超聲波清洗機將磁性粒子分散均勻；②稱取10-800mg羧甲基殼聚糖溶于20mL PBS pH＝7.4的緩沖溶液中，同時加入0.1-0.5g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽EDAC活化羧甲基殼聚糖表面的基團；③將①和②兩溶液混合，在恒溫水浴振蕩器中25℃振蕩2-6h，在震蕩過程中緩慢滴入濃度為5-20mg/mL的CaCl₂溶液，進行離子交聯共混包覆，反應結束后用磁鐵收集產物，再依次用蒸餾水和PBS pH＝7.4緩沖溶液充分洗滌，即得到羧甲基殼聚糖磁性納米復合物；

(b)采用反相微乳液法制備磁性熒光復合納米微球：

取5-20mL油相環己烷，1-5mL表面活性劑曲拉通-100，1-5mL助表面活性劑正己醇和適量水加入三口瓶中，攪拌30-60min形成均勻的微乳液；將步驟(a)中制備的0.005-0.03g羧甲基殼聚糖磁性納米復合物加入到天然有機高分子的溶液中，超聲20-60min，使磁性納米微粒分散均勻得到反應溶液A；取制備的濃縮的水相量子點溶于蒸餾水中，得到反應溶液B；將A和B逐滴加入反相微乳液體系中，攪拌30-50min后加入交聯劑，常溫下攪拌反應10-30h，用丙酮破乳，離心分離，再依次用乙醇和蒸餾水交替洗滌，即得到磁性熒光復合納米微球；

步驟(a)中羧甲基殼聚糖的分子量為2×10⁵-2.5×10⁵，羧甲基殼聚糖在磁性納米顆粒表面的厚度為3-10nm；步驟(b)中交聯劑為甲醛、乙二醛或戊二醛，濃度為4％-15％；步驟(b)中羧甲基殼聚糖磁性納米復合物與量子點的摩爾比為1:1-1:20。

2.根據權利要求1所述的一種磁性熒光復合納米微球的制備方法，其特征是，所得到的磁性熒光復合納米顆粒進行表面官能團修飾，包括以下具體步驟：將磁性熒光復合納米顆粒分散到水中，加入含有官能團的烷氧基硅烷試劑，攪拌1-36h，離心分離，得到表面官能團修飾的磁性熒光復合納米顆粒；所用的含有官能團的烷氧基硅烷試劑為：氨丙基三甲氧基硅烷、氨乙基三甲氧基硅烷、氨甲基三甲氧基硅烷、氨丙基三乙氧基硅烷、氨乙基三乙氧基硅烷、氨甲基三乙氧基硅烷、氨甲基三丙氧基硅烷、氨乙基三丙氧基硅烷、氨丙基三丙氧基硅烷、巰丙基三甲氧基硅烷、巰乙基三甲氧基硅烷、巰甲基三甲氧基硅烷、巰丙基三乙氧基硅烷、巰乙基三乙氧基硅烷、巰甲基三乙氧基硅烷、巰甲基三丙氧基硅烷、巰乙基三丙氧基硅烷、巰丙基三丙氧基硅烷中的一種。

3.根據權利要求1所述的一種磁性熒光復合納米微球的制備方法，其特征在于，所述的磁性熒光復合納米微球的粒徑為10-220nm；所述的磁性納米顆粒MNPs為超順磁、順磁或鐵磁性的金屬及金屬氧化物，磁性納米顆粒的制備方法為共沉淀法或水熱法；磁性納米顆粒表面含有羥基、氨基、羧基中的至少一種。

4.根據權利要求1所述的一種磁性熒光復合納米微球的制備方法，其特征在于，所述的量子點為表面帶有親水基團的水溶性量子點，量子點為II-VI，III-V族半導體材料，或者為II-VI和III-V族半導體材料形成的復合材料，所述量子點粒徑為1.5-10nm。

5.根據權利要求4所述一種磁性熒光復合納米微球的制備方法，其特征是：所述量子點表面含有巰基、羧基、氨基中的至少一種；半導體量子點合成中所使用的親水基團配體為3-巰基丙酸、巰基乙酸、L-半胱氨酸、2-巰基丙酸、巰基丁酸、巰基戊酸、巰基己酸、巰基丁二酸、巰基乙醇、巰基丙醇、巰基乙胺中的一種或幾種。