[發明專利]一種肉桂提取物的制備方法及對白血病K562細胞的作用

在審

• 申請號: 201510051319.1
• 申請日: 2015-01-31
• 公開（公告）號: CN104815000A
• 公開（公告）日: 2015-08-05
• 發明（設計）人: 楊同華;關心;劉陽;歐陽紅梅;蔣雅先;朱紅艷;胡芃;楊艷梅;賴洵;張海溪
• 申請（專利權）人: 云南省第一人民醫院
• 主分類號: A61K36/54
• 分類號: A61K36/54;A61P35/02
• 代理公司: 四川君士達律師事務所 51216
• 代理人: 芶忠義

技術領域

本發明屬于醫學技術領域，涉及一種肉桂提取物的制備方法及對白血病K562細胞的作用。

背景技術

三陽血傣因治療腫瘤具有良效和埃及衛生部有國際合作研究[1]，其中所用到的肉桂是屬于樟科家族的常綠喬木的外皮，含有多種活性成分如精油(肉桂醛，肉桂醛)，鞣質，粘液和碳水化合物。近年來，全世界對肉桂的藥用功效已有很多研究，肉桂的另一種水溶性成分，MHCP(甲基羥查耳酮聚合物)，最近被認為對胰島素模擬物的性能有影響[2]。美國農業部的研究人員使用肉桂作用于淋巴瘤，驚人的是在24小時內肉桂通過中斷細胞的G2/M期來使細胞停止增殖，這意味著有絲分裂(細胞分裂)被終止，盡管在細胞周期的合成期(S)不是這樣。但是肉桂可能是通過抑制細胞的某些可促進有絲分裂的磷酸酶[3]，因此，研究這些致病因素，針對可能有助于預防白血病的關鍵來實現。在以前的報告中有報道，肉桂提取物具有抗腫瘤作用，也具有通過抑制NFkappaB的AP1和小鼠黑色素瘤模型聯系起來來增強促凋亡活性[4]。

近年來，利用人結腸癌上皮細胞Caco-2模型在藥物研究方面因其特殊的結構和生理生化作用取得了令人鼓舞的進展。該細胞單層模型和人體小腸上皮細胞相類似。采用中藥經transwell轉運池Caco-2細胞模型吸收轉運后的過濾液作用于研究的白血病細胞，可替代中藥血清學方法，更能體現中藥在體內的真正作用情形。

發明內容

本發明揭示肉桂提取物對白血病K562細胞的作用。?

肉桂提取物的制備方法按照以下步驟：

步驟1：肉桂的干燥粉末，用乙醇：水為80:20作為溶劑，萃取三次；

步驟2：減壓回流除去溶劑后，得到殘余物；

步驟3：將殘余物溶解在丙酮中，過濾，將丙酮溶液在真空中蒸發得到的丙?酮可溶提取物，將其懸浮在水中；

步驟4：然后用石油醚和EtOAc利用沸點不同進行分離，得到水溶性提取物；

步驟5：水溶性提取物經硅膠柱層析，用氯仿：甲醇：水為80:20:2.5得到肉桂提取物。

附圖說明

圖1A(-)-(7′S,8S,8′R)-4,4′-dihydroxy-3,3′,5,5′

-tetramethoxy-7′,9-epoxylignan-9′-ol-7-one；

圖1B(-)-lyoniresinol?3α-O-β-d

-glucopyranoside；

圖1C3,4,5-trimethoxyphenolβ-d–apiofuranosyl(1→6)-β-d

-glucopyranoside；

圖2A掃描電子顯微鏡15000×；

圖2B掃描電子顯微鏡3000×；

圖2C透射電子顯微鏡20000×；

圖3A普萘洛爾標準品；

圖3B普萘洛爾經transwell吸收；

圖3C阿替洛爾標準品；

圖3D阿替洛爾經transwell吸收；

圖4A:肉桂提取物A標準品；

圖4B:經transwell吸收的附子提取物肉桂提取物A；

圖4C:肉桂提取物B標準品；

圖4D：經transwell吸收的附子提取物肉桂提取物B；

圖4E:肉桂提取物C標準品；

圖4F:經transwell吸收的附子提取物肉桂提取物C；

圖5A:肉桂提取物A；

圖5B:肉桂提取物B；

圖5C:肉桂提取物C；

圖6A陰性對照組的K562細胞；

圖6B50μM肉桂提取物A作用K562細胞72h；

圖6C50μM肉桂提取物B作用K562細胞72h；

圖6D50μM肉桂提取物C作用K562細胞72h；

圖7K562細胞系各階段細胞周期分布和DNA含量分析；

圖850μM和75μM肉桂提取物A,B,C作用K562細胞72h對細胞周期的影響；

圖9A肉桂提取物作用K562細胞72h對細胞凋亡的影響,陰性組；

圖9B肉桂提取物作用K562細胞72h對細胞凋亡的影響,50μM肉桂提取物；

圖9C肉桂提取物作用K562細胞72h對細胞凋亡的影響,75μM肉桂提取物；

圖10A:K562細胞分化抗原圖，PE-CD36；

圖10B:K562細胞分化抗原圖，FITC-CD13；