[發明專利]一種桑黃菌子實體菌絲分離方法

有效

• 申請號: 201510048790.5
• 申請日: 2015-01-30
• 公開（公告）號: CN104630074B
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 邵偉;唐明;熊澤
• 申請（專利權）人: 三峽大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務所42103
• 代理人: 彭永念

技術領域

本發明涉及一種子實體菌絲分離方法，尤其是涉及一種桑黃菌子實體菌絲分離方法，屬于藥用菌菌種分離領域。

背景技術

桑黃屬擔子菌亞門(Basidiomycotas)、層菌綱(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、銹革孔菌科(Hymenochae taceae)、針層孔菌屬 (Phellinus Quel.)，因其子實體顏色鮮黃而俗稱為桑黃，是珍稀藥用真菌。桑黃是目前國際公認的抗腫瘤最好的大型真菌之一，無任何毒性作用，是一種極具開發價值的珍貴藥用真菌。由于野生桑黃菌的資源有限，人們就開始了人工培養，但無論是人工栽培還是液體發酵菌絲體生產，獲得高品質的優良菌菌絲體是關鍵。目前，在實際的桑黃菌規?；a的菌種分離和篩選過程中，桑黃菌純菌絲的分離多半采用常規的組織分離法，如：CN200710018319.7所公開的“取桑黃子實體，用干凈刷子刷去菇體表面的雜質，用75%酒精擦洗固體外表面數次，再在0.5%甲硝唑溶液里浸泡5-10分鐘進行消毒，再將己處理消毒好的子實體在超凈工作臺上撕開，用己滅菌的解剖刀在菌片中央切取米粒大的組織1塊，放入試管斜面培養基表面”。其關鍵就是要對子實體進行化學藥劑的消毒，由于桑黃菌子實體十分堅硬，且木質化，使得對桑黃菌子實體的消毒、組織取塊操作十分繁瑣，并不易消毒徹底，使得用傳統的組織分離法從桑黃菌子實體獲得菌絲的雜菌污染率非常高，成功率非常低，且重復工作量大。

發明內容

本發明的目的是針對以上問題，提供一種桑黃菌子實體菌絲分離方法，通過該方法可以方便、有效地從桑黃菌子實體獲得其菌絲。

為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：一種桑黃菌子實體菌絲分離方法，具體步驟為：

將完整的桑黃菌子實體放入培養瓶中，加入液體浸沒，然后煮沸并保持5-20秒，再在25-37℃培養8-72小時，重復前述步驟的煮沸、培養多次后，桑黃菌子實體上長出菌絲，可進行菌絲分離。

所述培養瓶為廣口瓶，加熱煮沸前用3層報紙嚴密包扎瓶口；桑黃菌子實體一般較大，采用廣口瓶方便取放桑黃菌子實體和分離菌絲。

所述的液體為自來水、蒸餾水、純凈水、土豆汁或豆芽汁中的一種。

優選的方案中，所述煮沸時間為10-20秒。可充分殺死桑黃菌子實體表面的微生物，但不會殺死桑黃菌子實體內部要分離的菌絲。

進一步地，所述煮沸時間為15秒。

所述煮沸、培養過程共進行四次，其中前三次的培養溫度為35℃-37℃，培養時間為8-24小時，最后一次的培養溫度為25℃-28℃，培養時間為48-72小時。

進一步地，前三次的培養時間為8-12小時，最后一次的培養時間為60-72小時。

本發明的有益效果為：

1、由于桑黃菌子實體十分堅硬，且木質化明顯，組織取塊麻煩，且不易消毒徹底，用傳統的組織分離法從桑黃菌子實體獲得菌絲的雜菌污染率非常高，采用短時間反復的煮沸、培養的方式，能夠很好的將桑黃菌子實體表面及淺層的雜菌殺死，并有效地保護了桑黃菌子實體內部的組織的活性；

2、原材料，如所用的液體易得、制備方便；

3、相比傳統的分離方法，無需使用超凈工作臺和高壓滅菌鍋等設備，非常適合桑黃菌子實體菌絲野外分離操作；特別是無條件進行實驗室分離時。

4、本發明的方法簡單，操作中染雜率低，成功率高。

5、由于經過多次反復加熱煮沸，桑黃菌子實體中的營養物質溶入液體中，使得后期培養的桑黃菌菌絲較傳統方式分離的菌絲生長快，培養時間短。

具體實施方式

下面結合實施例來進一步說明本發明，但實施例僅在于說明本發明，而不是對其進行限制。

實施例1：

取完整的桑黃菌子實體（半徑3-4cm、厚2-3cm）放入廣口培養瓶（口徑7.5cm、高12cm）中，加入120ml自來水，然后用3層報紙嚴密包扎瓶口，加熱培養瓶至水沸騰，并保持10秒鐘，冷卻后，在35-37℃條件下培養8-12小時，取出，再重復前述煮沸、培養2次；最后在第4次煮沸10秒鐘，冷卻后，在25-28℃條件下培養72小時即在桑黃菌子實體上長出1cm菌絲，這時就可取出進行菌絲分離了。

實施例2：