[發(fā)明專利]一種抗黑色素瘤的干細胞貼劑及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510025603.1
• 申請日: 2015-01-20
• 公開（公告）號: CN104623638B
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發(fā)明（設計）人: 周萱
• 申請（專利權）人: 奧思達干細胞有限公司
• 主分類號: A61K38/20
• 分類號: A61K38/20;A61K9/70;A61K47/42;A61K47/34;A61P35/00;A61K31/375;A61K35/16;A61K35/28
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1.一種抗黑色素瘤的干細胞貼劑，其特征在于，由下述主要原料和基質部分制備而成，主要原料包括1×10⁶個來源于骨髓的間充質干細胞，1000U白細胞介素Ⅱ、100mg維生素C和20μl富血小板血漿，基質部分包括生物膜和醫(yī)用級粘貼層。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種抗黑色素瘤的干細胞貼劑，其特征在于，至少包括1×10⁶個來源于骨髓的間充質干細胞。

3.權利要求1所述的一種抗黑色素瘤的干細胞貼劑的制備方法，其特征在于，由下述步驟組成：來源于骨髓的間充質干細胞的制備，生物膜的制備和預處理，間充質干細胞生物膜的構建，間充質干細胞生物膜的誘導和抗黑色素瘤的干細胞貼劑形成：其中，所述的來源于骨髓的間充質干細胞的制備步驟具體是：分離提取來源于骨髓間充質干細胞，混勻成單細胞懸液備用；

所述的生物膜的制備和預處理步驟具體是：制備高分子聚乙內酯多元醇-膠原復合生物膜作為基礎基質，在細胞接種前進行生物膜的預處理；將生物膜置入適宜大小的培養(yǎng)皿中，用3M的NaOH于37℃浸泡2h，PBS緩沖液浸泡10次，每次15分鐘；

所述的間充質干細胞生物膜的構建步驟具體是：將上述步驟制備的生物膜置于培養(yǎng)皿底部，然后接種來源于骨髓的間充質干細胞單細胞懸液，所用的培養(yǎng)基為90%DMEM培養(yǎng)基，和10%胎牛血清替代品，連續(xù)培養(yǎng)48小時；

所述的抗黑色素瘤的干細胞貼劑誘導步驟具體是：向上述步驟培養(yǎng)皿更換培養(yǎng)液，仍用90%DMEM培養(yǎng)基，和10%胎牛血清替代品，并添加TNFα誘導培養(yǎng)4-5小時，其中TNFα的誘導濃度為50-100ng/ml，然后將制備的生物膜用PBS清洗兩遍并置于37℃、5%CO₂細胞培養(yǎng)箱30分鐘后備用；

所述的抗黑色素瘤的干細胞貼劑的形成步驟具體是：將上述步驟制備的生物膜從培養(yǎng)箱中取出，添加1000U的白細胞介素Ⅱ、100mg維生素C和20μl富血小板血漿，然后將生物膜置于由防粘層和粘貼層組成的醫(yī)用級粘膠層上，即制備完成抗黑色素瘤的干細胞貼劑。