[發(fā)明專利]一種用于抑制膠質(zhì)瘤增殖的干擾TGM2基因的小分子RNA及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510023923.3
• 申請日: 2015-01-16
• 公開（公告）號(hào): CN104561004B
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 俞磊;吳小江;祁偉;樓小燕;吳雪松
• 申請（專利權(quán)）人: 上海生博生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/10;A61K31/713;A61P35/00
• 代理公司: 上海市匯業(yè)律師事務(wù)所 31325
• 代理人: 唐嘉偉

本發(fā)明公開了一種用于抑制膠質(zhì)瘤增殖的干擾TGM2基因的小分子RNA及其制備方法及其應(yīng)用。該干擾TGM2基因的小分子RNA為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的堿基序列。本發(fā)明設(shè)計(jì)對膠質(zhì)瘤增殖有促進(jìn)作用的干擾TGM2基因的小分子RNA，應(yīng)用膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U373細(xì)胞)模型研究其對膠質(zhì)瘤增殖的抑制作用，為膠質(zhì)瘤的基因治療提供了一種新分子藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種小分子干擾RNA(即shRNA)，尤其涉及一種用于抑制膠質(zhì)瘤增殖的干擾TGM2基因的小分子RNA。此外，本發(fā)明還涉及該干擾TGM2基因的小分子RNA的制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

TGM2蛋白是一種廣泛表達(dá)的蛋白交聯(lián)酶，對細(xì)胞增殖、細(xì)胞粘附和細(xì)胞凋亡起到了重要的調(diào)控作用，在多種癌細(xì)胞中高表達(dá)，并參與藥物耐受和腫瘤轉(zhuǎn)移，并與多種神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān)。

膠質(zhì)瘤是發(fā)生于神經(jīng)外胚層的腫瘤，故亦稱神經(jīng)外胚層腫瘤或神經(jīng)上皮腫瘤。腫瘤起源于神經(jīng)間質(zhì)細(xì)胞，即神經(jīng)膠質(zhì)、室管膜、脈絡(luò)叢上皮和神經(jīng)實(shí)質(zhì)細(xì)胞，即神經(jīng)元。大多數(shù)腫瘤起源于不同類型的神經(jīng)膠質(zhì)，但根據(jù)組織發(fā)生學(xué)來源及生物學(xué)特征類似，對發(fā)生于神經(jīng)外胚層的各種復(fù)查腫瘤病，一般都稱為神經(jīng)膠質(zhì)瘤。

膠質(zhì)瘤的分類方法很多，臨床工作者往往采用的是分類比較簡單的Kernohan分類法。各型膠質(zhì)瘤中，以星形細(xì)胞瘤最多，其次為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，其后依次為髓母細(xì)胞瘤、室管膜瘤、少枝膠質(zhì)瘤、松果體瘤、混合性膠質(zhì)瘤、脈絡(luò)叢乳頭狀瘤、未分類膠質(zhì)瘤及神經(jīng)元性腫瘤。各型膠質(zhì)瘤的好發(fā)部位不同，如星形細(xì)胞瘤成人多見于大腦半球，兒童則多發(fā)在小腦；膠質(zhì)母細(xì)胞瘤幾乎均發(fā)生于大腦半球；髓母細(xì)胞瘤發(fā)生于小腦蚓部；室管膜瘤多見于第4腦室；少枝膠質(zhì)瘤大多發(fā)生于大腦半球。

膠質(zhì)瘤以男性較多見，特別在多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、髓母細(xì)胞瘤，男性明顯多于女性。各型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤多見于中年，室管膜瘤多見于兒童及青年，髓母細(xì)胞瘤幾乎都發(fā)生在兒童。膠質(zhì)瘤的部位與年齡也有一定關(guān)系，如大腦星形細(xì)胞瘤和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤多見于成人，小腦膠質(zhì)瘤(星形細(xì)胞瘤、髓母細(xì)胞瘤、室管膜瘤)多見于兒童。

膠質(zhì)瘤大多緩慢發(fā)病，自出現(xiàn)癥狀至就診時(shí)間一般為數(shù)周至數(shù)月，少數(shù)可達(dá)數(shù)年。惡性程度高的和后顱窩腫瘤病史較短，較良性的或位于靜區(qū)的腫瘤病史較長。腫瘤若有出血或囊變，癥狀會(huì)突然加重，甚至有類似腦血管病的發(fā)病過程。膠質(zhì)瘤的臨床癥狀可分兩方面，一是顱內(nèi)壓增高癥狀，如頭痛、嘔吐、視力減退、復(fù)視、精神癥狀等；另一是腫瘤壓迫、浸潤、破壞腦組織所產(chǎn)生的局灶癥狀，早期可表現(xiàn)為刺激癥狀如局限性癲癇，后期表現(xiàn)為神經(jīng)功能缺失癥狀如癱瘓。

膠質(zhì)瘤的診斷，根據(jù)其生物學(xué)特征、年齡、性別、好發(fā)部位及臨床過程進(jìn)行分析，在病史及體征基礎(chǔ)上，采用電生理、超聲波、放射性核素、放射學(xué)及核磁共振等輔助檢查，定位正確率幾乎是100％，定性診斷正確率可在90％以上。

RNA干擾(RNA interference，RNAi)是指由雙鏈RNA介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)與其序列同源的mRNA發(fā)生特異性降解，從而導(dǎo)致基因表達(dá)沉默的現(xiàn)象，這是一種轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默機(jī)制。RNA干擾(RNAi)的基本原理是利用具有同源性的雙鏈RNA(dsRNA)迅速阻斷序列特異的目標(biāo)基因的表達(dá)活性，是實(shí)驗(yàn)室中一種有效的阻斷基因表達(dá)的工具。

目前，尚未見有關(guān)用于抑制膠質(zhì)瘤增殖的TGM2基因的相同序列小分子干擾RNA的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題之一是提供一種用于抑制膠質(zhì)瘤增殖的干擾TGM2基因的小分子RNA。

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題之二是提供該干擾TGM2基因的小分子RNA的制備方法。

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題之三是提供該干擾TGM2基因的小分子RNA的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：