[發明專利]一種篩選α–淀粉酶抑制劑的方法

有效

• 申請號: 201510014534.4
• 申請日: 2015-01-12
• 公開（公告）號: CN105842380B
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 谷麗華;江悅;侴桂新;王崢濤
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90
• 代理公司: 上海海頌知識產權代理事務所(普通合伙)31258
• 代理人: 何葆芳

1.一種篩選α–淀粉酶抑制劑的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a)配制酶促反應緩沖液、底物溶液、α-淀粉酶溶液、顯色劑溶液和供試品溶液，備用；所述的酶促反應緩沖液選用pH值為6.5～9.0的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液，是由三羥甲基氨基甲烷與鹽酸及氯化鈣形成，其中的三羥甲基氨基甲烷的摩爾濃度為25～80mmol/L；所述的底物溶液選用pH值為6.0～7.0、含0.05wt％～1wt％可溶性淀粉的磷酸鹽緩沖溶液；所述的α-淀粉酶溶液選用含α-淀粉酶的活性濃度≥6U/mL的酶促反應緩沖液；所述的顯色劑溶液選用碘含量為0.1～20mg/mL的碘-碘化鉀水溶液；

b)將供試品溶液點樣于薄層板上，揮去溶劑后備用或使用適宜的展開劑展開后取出、晾干備用；

c)將經步驟b)處理后的薄層板浸漬于底物溶液中，然后取出、揮干溶劑；

d)將經步驟c)處理后的薄層板浸漬于α-淀粉酶溶液中，在5～50℃進行酶促反應10～60分鐘；反應完成后，取出薄層板、揮干溶劑；

e)將經步驟d)處理后的薄層板浸漬于顯色劑溶液中進行顯色反應；

f)對經步驟e)顯色后的薄層板進行檢視：在可見光下出現的白色或黃色或棕色背景下的藍色斑點即為α-淀粉酶抑制劑。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的磷酸鹽緩沖溶液由磷酸二氫鈉與磷酸氫二鈉形成，且所形成的磷酸鹽的摩爾濃度為15～25mmol/L。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的顯色劑溶液由碘化鉀與碘按質量比為3:1形成的碘含量為1～5mg/mL的水溶液。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的薄層板選用硅膠板、聚酰胺板、纖維素板中的任意一種。