[發(fā)明專利]豬初生重性狀相關(guān)PLAC1基因分子標(biāo)記的克隆及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510014211.5
• 申請日: 2015-01-12
• 公開（公告）號: CN104593494A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 余梅;洪林君;潘麗;李小平;王學(xué)敏;趙書紅;李新云;李長春
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 張紅兵

1.一種與豬初生重相關(guān)性狀檢測的分子標(biāo)記，其特征在于，該分子標(biāo)記的核苷酸序列如下所示：

CTGCTACGACGTGTTCACCTTGTCTCAGGCCGGCCGAAGGCCCACCTGCCACTGTCCGCCCTATGTCTTCAGRGCAGGCGGGCGTACTTAGCCCTGCGGGCCCAGGCGGGGGCTCGGGAGGGCCACCTGTGCAGTAGTCTTCCTTCCTTTATACTTCTGACGATGAATCTCTTCTCTCGGGTGATCTGGCTGAGTCCAGGGATCCCCGGGCTTGGGGGGCTCCTGTACTTGCCCTTTCTGAAATTGGTATATACTAGGGACTAATCCGTGCTCTTGTGGCCCTCTTATGGGTAGCCTGTGCT

上述序列中的R是C或T，導(dǎo)致HhaI-RFLP多態(tài)性。

2.一種檢測如權(quán)利要求1所述分子標(biāo)記的引物對，其DNA序列如下所示：

正向引物：CTGCTACGACGTGTTCACCTT，

反向引物：AGCACAGGCTACCCATAAGAG。

3.一種分子標(biāo)記在豬初生重性狀關(guān)聯(lián)分析中的應(yīng)用，其特征包括：

1)用人PLAC1基因cDNA為信息探針，作同源序列篩選，獲得同源性高的表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)，然后對EST進行拼接；提取豬妊娠95天胎盤組織總RNA并做cDNA第一鏈反轉(zhuǎn)錄；設(shè)計引物對，該引物對的正向引物為TCCTCTTCCGCCAATCCC，反向引物為GCCATCAGAAATTTATTTTCTCTC，用RT-PCR方法擴增豬PLAC1基因的cDNA片段，PCR產(chǎn)物純化克隆和測序，通過序列分析獲得如SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列；

2)根據(jù)SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列設(shè)計引物對，該引物對的核苷酸序列如下所示：正向引物：CTGCTACGACGTGTTCACCTT，反向引物：AGCACAGGCTACCCATAAGAG，擴增豬基因組DNA，將PCR產(chǎn)物純化克隆和測序，通過序列分析獲得如下所述的核苷酸序列：

CTGCTACGACGTGTTCACCTTGTCTCAGGCCGGCCGAAGGCCCACCTGCCACTGTCCGCCCTATGTCTTCAGRGCAGGCGGGCGTACTTAGCCCTGCGGGCCCAGGCGGGGGCTCGGGAGGGCCACCTGTGCAGTAGTCTTCCTTCCTTTATACTTCTGACGATGAATCTCTTCTCTCGGGTGATCTGGCTGAGTCCAGGGATCCCCGGGCTTGGGGGGCTCCTGTACTTGCCCTTTCTGAAATTGGTATATACTAGGGACTAATCCGTGCTCTTGTGGCCCTCTTATGGGTAGCCTGTGCT

上述序列中的R是C或T，導(dǎo)致HhaI-RFLP多態(tài)性；

3)檢測目的基因PLAC1?mRNA在豬胎盤的絨毛膜組織樣中轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，設(shè)計用于檢測目的基因PLAC1?mRNA表達(dá)水平的引物對以及作為內(nèi)參基因GAPDH的引物對，其核苷酸序列分別如下所示：

擴增目的基因PLAC1的引物對如下：

正向引物：GAAACCTCCACCAGACAGC，

反向引物：CCGTGACCATGAGCCAGT?3；

擴增內(nèi)參基因GAPDH的引物對如下：

正向引物：CACCAGGGCTGCTTTTAACTCTG，

反向引物：GATGACAAGCTTCCCGTTCTCC?3；

4)對PLAC1基因的組織表達(dá)譜進行分析；

5)定位PLAC1基因的mRNA在豬胎盤組織的表達(dá)位置；

6)應(yīng)用PCR-RFLP方法對序列表SEQ?ID?NO：1的第73位堿基進行檢測，然后進行基因型與豬初生重性狀的關(guān)聯(lián)分析。

4.權(quán)利要求2所述引物對在豬初生重分子標(biāo)記輔助選擇中的應(yīng)用。