[發(fā)明專利]一種豬脂肪組織無(wú)細(xì)胞基質(zhì)材料的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510014130.5
• 申請(qǐng)日: 2015-01-12
• 公開（公告）號(hào): CN104548207B
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂青;譚秋雯;張迪;熊炳鈞;范雪嬌;楊志明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36;A61L27/56
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)51222
• 代理人: 李高峽,張娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種豬脂肪組織無(wú)細(xì)胞基質(zhì)材料的制備方法及其用途，屬于生物材料領(lǐng)域。

背景技術(shù)

近幾十年來(lái)我國(guó)女性乳腺癌發(fā)病率持續(xù)飆升，目前已成為我國(guó)婦女第一大惡性腫瘤，同時(shí)由于皮膚軟組織腫瘤、外傷、先天畸形、深度燒傷后及慢性潰瘍等疾病也會(huì)造成不同程度軟組織缺損，直接影響患者的外形美觀乃至功能，對(duì)患者的生活質(zhì)量造成直接的影響；加之人體形體的美學(xué)再塑需求旺盛：根據(jù)美國(guó)整形外科醫(yī)師協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì)，2012年美國(guó)共進(jìn)行28.6萬(wàn)次隆乳術(shù)，在全美整形術(shù)中排名第一；而軟組織填充以200萬(wàn)次在微整形術(shù)中排名第二?？梢娎硐氲能浗M織缺損修復(fù)材料市場(chǎng)需求巨大。根據(jù)BCC2012年1月發(fā)布的報(bào)告顯示，全球?qū)M織工程和再生醫(yī)學(xué)相關(guān)醫(yī)用產(chǎn)品的市場(chǎng)在2011年達(dá)到598億美元，2016年預(yù)計(jì)能達(dá)到897億美元，復(fù)合年增長(zhǎng)率(Compounded annual growth rate,CAGR)為8.4％。而BCC發(fā)布的報(bào)告稱2011年全球?qū)φ蜗嚓P(guān)材料的市場(chǎng)在240萬(wàn)公噸，而2016年預(yù)計(jì)將達(dá)到460萬(wàn)公噸，復(fù)合年增長(zhǎng)率為13.8％。

脂肪組織是軟組織缺損修復(fù)重建，特別是女性乳房修復(fù)重建理想的填充物，但我國(guó)組織工程產(chǎn)業(yè)化總體正處于臨床前研究階段，研究產(chǎn)品多集中于骨、軟骨、皮膚、角膜等，脂肪等軟組織領(lǐng)域研究相對(duì)滯后，但是需求持續(xù)增長(zhǎng)，因此具有廣闊的發(fā)展空間和市場(chǎng)需求。

然而，因脂肪組織上具有多種免疫原性物質(zhì)，直接用于機(jī)體會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，副作用強(qiáng)，需要采用脫細(xì)胞方法脫去其免疫原性物質(zhì)。

脫細(xì)胞的方法包括物理法、化學(xué)法、酶法，化學(xué)法包括酸堿處理、非離子去垢劑處理、離子去垢劑處理、兩性離子去垢劑助理、三磷酸鹽處理、低滲和高滲液處理、螯合劑處理。其中，物理法和化學(xué)法中的非離子去垢劑吹了、低滲和高滲液處理較為溫和，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的影響較小，但是脫細(xì)胞不徹底；化學(xué)法中離子去垢劑可以有效脫細(xì)胞，但是對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)有影響；而酶法處理可以有效脫細(xì)胞，且對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的影響較小，但是存在價(jià)格昂貴，成本高，難以工業(yè)應(yīng)用的缺陷。

由于脂肪組織的特殊性，目前報(bào)道的脂肪脫細(xì)胞方法均采用了胰酶、DNA酶來(lái)處理，可以有效脫細(xì)胞和維持細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)，但是酶的價(jià)格昂貴，導(dǎo)致生產(chǎn)成本太高，難以大工業(yè)應(yīng)用，同時(shí)，整個(gè)處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，通常需要處理5天或更長(zhǎng)時(shí)間。

急需一種成本低廉、處理時(shí)間短的脫細(xì)胞方法，制備脂肪組織無(wú)細(xì)胞基質(zhì)制備方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種新的制備豬脂肪組織無(wú)細(xì)胞基質(zhì)材料的方法。

本發(fā)明制備豬脂肪組織無(wú)細(xì)胞基質(zhì)材料的方法，包括如下步驟：

(1)取新鮮豬皮下脂肪，清洗，剪碎，加水或者生理鹽水，勻漿，離心，得沉淀，PBS溶液或水漂洗；

(2)將沉淀粉碎，用SDS溶液漂洗，再用PBS溶液或水漂洗，離心，得沉淀；

(3)將沉淀用異丙醇溶液漂洗，再用PBS溶液或水漂洗，即可。

漂洗：是指用水或者溶液反復(fù)洗滌。

步驟(1)中，剪碎至大小為(0.5～1.5)cm×(0.5～1.5)cm×(0.5～1.5)cm。

優(yōu)選地，剪碎至大小為1cm×1cm×1cm。

步驟(1)中，勻漿前，所述水或生理鹽水的用量為皮下脂肪體積的0.5～2倍。優(yōu)選地，所述水或生理鹽水的用量為皮下脂肪體積的1倍。

步驟(1)中，所述勻漿的轉(zhuǎn)速為10000～15000rpm，時(shí)間為3～7min。優(yōu)選地，所述勻漿的轉(zhuǎn)速為12000rpm，時(shí)間為5min。

步驟(1)中，所述離心的轉(zhuǎn)速為3000～4000rpm，時(shí)間為3～7min。優(yōu)選地，所述離心的轉(zhuǎn)速為3500rpm，時(shí)間為5min。

步驟(2)中，所述粉碎是球磨粉碎，球磨的轉(zhuǎn)速為2000～3000r/s，時(shí)間為3～7min。優(yōu)選地，所述球磨的轉(zhuǎn)速為2500/s，時(shí)間為5min。

步驟(2)中，所述SDS溶液的濃度為0.25％～1％。

優(yōu)選地，所述SDS溶液的濃度為0.5％。

步驟(2)中，所述SDS溶液漂洗的時(shí)間為2～6h。

優(yōu)選地，所述SDS溶液漂洗的時(shí)間為4h。

步驟(3)中，所述異丙醇溶液的濃度為80～100％。

優(yōu)選地，所述異丙醇溶液的濃度為100％。

步驟(3)中，所述異丙醇溶液的漂洗時(shí)間為1～3h。

優(yōu)選地，所述異丙醇溶液的漂洗時(shí)間為2h。

本發(fā)明還提供了前述任意一項(xiàng)方法制備得到的豬脂肪組織無(wú)細(xì)胞基質(zhì)材料。