[發(fā)明專利]一種海洋微藻的串聯(lián)培養(yǎng)和快速收集方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201510002938.1
• 申請日: 2015-01-06
• 公開（公告）號: CN104593262A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王培磊
• 申請（專利權(quán)）人: 臨沂大學(xué)
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種海洋微藻的串聯(lián)培養(yǎng)及快速收集方法，其特征在于具體方法如下：

步驟1?培養(yǎng)液的制備

培養(yǎng)液成分配方：NaHCO₃?1份，NH₄NO₃?0.2份，尿素0.1份，人尿0.5份，Na₂SiO₃?0.005份，f/2微量元素溶液1份，f/2維生素溶液1份，磷酸鈣0.2份，牛糞浸出液1份，土壤浸出液0.8份，海泥抽取液0.5份，NiSiO₄·6H₂O?0.02份，NH₄VO₃?0.001份，Co(NO₃)₂·6H₂O?0.05份，Na₂WO₂·2H₂O?0.03份，煮沸冷卻海水1000份；裝入棕色磨口塞試劑瓶中，密封，放在搖床上搖勻15分鐘，置入4℃冰箱保存，備用；其中f/2微量元素溶液配方(按配制1000毫升溶液計)：ZnSO₄·4H₂O?23毫克，MnCl₂·4H₂O?178毫克，CuSO₄·5H₂O?10毫克，F(xiàn)eC₆H₅O₇·5H₂O?3.9克，Na₂MoO₄·2H₂O?7.3毫克，CoCl₂·6H₂O?12毫克，Na₂EDTA?4.35克，純水1000毫升；f/2維生素溶液配方(按配制1000毫升溶液計)：維生素B₁₂?0.5毫克，維生素B₁?100毫克，維生素H?0.5毫克，純水1000毫升；

步驟2?接種培養(yǎng)

取三個5000毫升潔凈三角燒瓶，加入步驟1所述培養(yǎng)液2500毫升，選生長旺盛、無污染、處于指數(shù)生長期的亞心形扁藻和球等鞭金藻藻種分別接種，接種密度亞心形扁藻2.5萬個細(xì)胞/毫升藻液，球等鞭金藻8萬個細(xì)胞/毫升藻液，輕輕搖勻3分鐘；用橡皮塞塞住瓶口，塞子上打上2個孔，孔的直徑為9毫米，插入兩根玻璃管，管的直徑為8毫米，一根為充氣管，另一根為排氣管，第2個瓶的充氣管與第一個瓶的排氣管相連，第3個瓶的充氣管與第2個瓶的排氣管相連，這樣充入的氣體經(jīng)過三個瓶子，可以得到3次利用；第一個桶的充氣管上端連接空氣壓縮機(jī)，另一端插入到藻液底部，充入混合氣體，氣體成分＝空氣98％+純CO₂?1.5％+一氧化氮0.3％+硫化氫0.2％，每天24小時不間斷充氣，氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可；將這3個三角燒瓶放入微藻培養(yǎng)室中培養(yǎng)，室內(nèi)空調(diào)控溫，日光燈管照明，以打開燈管的數(shù)量多少來控制光照強(qiáng)度，連續(xù)培養(yǎng)9天，前3天調(diào)節(jié)溫度至22℃，光照強(qiáng)度4500lux，光暗周期＝6h/L+6h/D，即提供間歇光，6小時連續(xù)光照，6小時連續(xù)黑暗，如此循環(huán)；第4-6天，調(diào)節(jié)溫度至24℃，光照強(qiáng)度6000lux，每天提供15小時連續(xù)光照，然后9小時連續(xù)黑暗，如此循環(huán)，至第7天，調(diào)節(jié)溫度至26℃，光照強(qiáng)度8000lux，每天24小時連續(xù)光照，沒有黑暗，每個瓶子補(bǔ)加蒸餾水500毫升；到第9天，亞心形扁藻細(xì)胞密度可達(dá)600萬/毫升藻液，球等鞭金藻藻細(xì)胞密度可達(dá)到1800萬/毫升藻液，即可收集藻細(xì)胞；

步驟3?所述的藻細(xì)胞進(jìn)行收集

按重量份配比計取硫酸亞鐵，甲殼素，氯化鋁各1000g，分別用粉碎機(jī)粉碎至面粉狀(粒徑大小以通過200目篩)，按重量比硫酸亞鐵1份，甲殼素3份，氯化鋁2份的比例混合，用攪拌機(jī)充分?jǐn)嚢琛⒒旌暇鶆颍瞥蓮?fù)合沉淀劑，取培養(yǎng)了9天的藻液1000份，加入所述復(fù)合沉淀劑0.4份，用空氣壓縮機(jī)連接一塑料管插入藻液充氣攪拌、混合15分鐘，將藻液置于5℃冷柜中(保持黑暗)靜置、沉淀24小時，由于沉淀劑的沉淀和溫度的突然降低，藻細(xì)胞迅速休克且下沉到瓶底，棄上清液，取底部粘稠牙膏狀藻泥，藻細(xì)胞收集完畢。