[發(fā)明專利]神經(jīng)元干細胞分化

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480056416.3
• 申請日: 2014-10-13
• 公開（公告）號: CN105658787A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 保羅·凱姆普;尼古拉斯·艾倫
• 申請（專利權(quán)）人: 加的夫大學(xué)學(xué)院咨詢有限公司
• 主分類號: C12N5/0793
• 分類號: C12N5/0793
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.從至少一種能夠譜系特異性分化的前體細胞產(chǎn)生神經(jīng)細胞的 神經(jīng)細胞分化培養(yǎng)基，其包含以下或由以下組成：

i)至少一種細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

ii)至少一種用于神經(jīng)細胞培養(yǎng)的無血清添加劑；

iii)細胞周期抑制劑；

iv)至少一種原肌球蛋白受體激酶B[TrkB]受體激動劑；

v)經(jīng)典Wnt通路激動劑；

vi)抗壞血酸或維生素C或其鹽或衍生物；以及

vii)鈣離子的溶液。

2.如權(quán)利要求1所述的神經(jīng)細胞分化培養(yǎng)基，其還包含以下至少 一種或多種或由以下至少一種或多種組成，包括其所有的組合：

viii)notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑；

ix)CREB(cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白)激活劑；

x)γ-氨基丁酸(GABA)受體激動劑；以及

xi)非經(jīng)典WNT通路激動劑。

3.如權(quán)利要求1或2所述的神經(jīng)分化培養(yǎng)基，其中所述細胞培養(yǎng) 基礎(chǔ)培養(yǎng)基選自DMEM、DMEM:F12。

4.如前述權(quán)利要求中任一項所述的神經(jīng)分化培養(yǎng)基，其中所述無 血清添加劑選自：N2添加劑、B27添加劑、谷氨酰胺添加劑、 NeuroBrew^TM。

5.如前述權(quán)利要求中任一項所述的神經(jīng)分化培養(yǎng)基，其中所述周 期抑制劑為G1/S細胞檢查點的抑制劑。

6.如權(quán)利要求5所述的神經(jīng)分化培養(yǎng)基，其中所述細胞周期抑制 劑選自：PD0332991、AZD5438、黃芩素、CI898三鹽酸鹽、大豆黃 素、WYE687二鹽酸鹽、YC1、夫拉平度、indisulam、purvalanol、 seliciclib、含羞草堿、purvalanol。

7.如前述權(quán)利要求中任一項所述的神經(jīng)分化培養(yǎng)基，其中所述原 肌球蛋白受體激酶B[TrkB]受體激動劑為腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子 (BDNF)、神經(jīng)營養(yǎng)蛋白-4(NT-4)、神經(jīng)膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子 (GDNF)、神經(jīng)營養(yǎng)蛋白-3(NT-3)、或以上的類似物。

8.如權(quán)利要求7所述的神經(jīng)分化培養(yǎng)基，其中所述原肌球蛋白受 體激酶B[TrkB]受體激動劑選自：7,8-二羥基黃酮、N,N',N”-三(2-羥乙 基)-1,3,5-苯三甲酰胺(LM22A4)、4′-二甲氨基-7,8-二羥基黃酮。

9.如前述權(quán)利要求中任一項所述的神經(jīng)分化培養(yǎng)基，其中所述經(jīng) 典Wnt通路激動劑為糖原合成酶激酶3β(GSK3β)抑制劑。

10.如權(quán)利要求9所述的神經(jīng)分化培養(yǎng)基，其中所述經(jīng)典Wnt通 路激動劑選自：CHIR99021、(2'Z,3'E)-6-溴靛紅-3'-肟(BIO)、(2'Z,3'E)-6- 溴靛紅-3'-丙酮肟(BIO-丙酮肟)、5-乙基-7,8-二甲氧基-1H-吡咯并[3,4-c] 異喹啉-1,3(2H)-二酮(3F8)、1-(7-甲氧基喹啉-4-基)-3-[6-(三氟甲基)吡 啶-2-基]尿素(A1070722)、N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N'-(5-硝基-2-噻唑 基)尿素(AR-A014418)、3-(2,4-二氯苯基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-1H- 吡咯-2,5-二酮(SB216763)、3-[(3-氯-4-羥苯基)氨基]-4-(2-硝基苯 基)-1H-吡咯-2,5-二酮(SB415286)、N-(3-氯-4-甲苯基)-5-(4-硝基苯 基)-1,3,4-噁二唑-2-胺(TC-G24)、2-甲基-5-[3-[4-(甲基亞硫?；?苯 基]-5-苯并呋喃基]-1,3,4-噁二唑(TCS2002)或3-[[6-(3-氨基苯基)-7H-吡 咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基苯酚雙三氟乙酸酯(TWS119)。

11.如權(quán)利要求2-13中任一項所述的神經(jīng)分化培養(yǎng)基，其中所述 notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑為γ-分泌酶抑制劑。