[發(fā)明專利]電泳基質(zhì)染色組合物和方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201480052897.0 | 申請日： | 2014-09-24 |
| 公開（公告）號： | CN105579839B | 公開（公告）日： | 2019-09-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | B·R·德沃里奇;S·德塞;G·J·奇爾默;P·A·貝爾;B·L·韋伯 | 申請（專利權(quán)）人： | 皮爾斯生物科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N27/447 | 分類號： | G01N27/447 |
| 代理公司： | 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 11038 | 代理人： | 羅菊華 |
| 地址： | 美國伊*** | 國省代碼： | 美國;US |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 電泳 基質(zhì) 染色 組合 方法 | ||
本發(fā)明提供了用于與包含經(jīng)分離的生物聚合物的基質(zhì)例如電泳凝膠一起使用的染色組合物和方法。所述組合物包含酸、有機(jī)溶劑和主要由非纖維素材料組成的通常平面的、流體可滲透的凝膠接觸層。酸和有機(jī)溶劑可以吸附至流體可滲透的凝膠接觸片，或可以吸附至可與凝膠接觸片的非凝膠接觸側(cè)接觸的層。在一個實施方案中，組合物是包含染色試劑的源電泳染色組合物。在一個實施方案中，組合物是包含吸附劑的槽電泳染色組合物。
本申請要求2013年9月26日提交的美國專利申請系列號61/882,951的優(yōu)先權(quán)，其通過引用以其整體明確地并入本文。
用于使用電場對基質(zhì)中的生物聚合物例如蛋白質(zhì)、核酸、寡糖等進(jìn)行染色的組合物(也稱為消耗品)和方法。染色組合物具有用于與基質(zhì)接觸的流體可滲透片。在一個實施方案中，流體可滲透片主要是非纖維素材料例如聚酯或聚酯共混物，并且在一個實施方案中是非聚合的非纖維素材料，例如，天然纖維材料。組合物包含含有染色試劑的源接觸片以及槽(sink)接觸片，其中所述染色試劑與生物聚合物相互作用、締合和/或結(jié)合。本發(fā)明的方法使用電場，利用這些源接觸片和槽接觸片對生物聚合物染色。在實施方案中，組合物是高吸收性、液體保持性和流體可滲透性的，其通過提供光滑表面、均勻的稠度和用于改善與基質(zhì)表面的適應(yīng)性的柔韌性中的至少一種來最大化與基質(zhì)的接觸。不受單一理論的約束，所公開的組合物與基質(zhì)之間接觸的最大化提供了電場電流的均勻傳輸并引起改善的染色和脫色。
美國專利申請公開號2010/0326828公開了用于在凝膠電泳后染色生物聚合物的組合物和方法，其使用紙材料，特別是吸水紙。染色溶液包含染色劑例如考馬斯藍(lán)R-250或G-250，其被預(yù)吸收或施加至多孔材料例如吸水紙。含有溶液的吸水紙被定位為與電泳凝膠的一側(cè)接觸，并且第二吸水紙(缺乏染料)被定位為與凝膠的另一側(cè)接觸，從而形成組裝體。這個組裝體被布置在一對電極之間并對電極且跨組裝體施加DC電壓。電極之間的電壓差導(dǎo)致染料遷移出含有溶液的吸水紙并進(jìn)入凝膠，其中該染色劑結(jié)合至凝膠基質(zhì)中的生物聚合物。保持電壓差以使任何未結(jié)合的染色劑完全遷移通過凝膠并進(jìn)入第二吸水紙中，從而使凝膠基質(zhì)脫色但不使基質(zhì)中的生物聚合物脫色。組合物和方法替代了用于染色電泳分離物的被動的擴(kuò)散驅(qū)動的過程；這些過程可能需要幾個小時來完成，而主動的電驅(qū)動染色過程需要短至6分鐘的時間。
如所述的，申請?zhí)?010/0326828使用紙材料例如濾紙、吸水紙、紙墊等，其是纖維素產(chǎn)品。商購可得的2.0蛋白染色系統(tǒng)(GenScript USA,Inc.,Piscataway NJ)基于棉纖維素纖維紙。
在電驅(qū)動染色方法中使用這些纖維素材料產(chǎn)生非期望的效果，例如電泳凝膠中高的背景和/或斑點背景。不受限于特定的理論，這樣的非期望的背景因紙材料的不均勻和相對硬的表面(其不提供與基質(zhì)表面的實質(zhì)最大和/或均勻的接觸)而產(chǎn)生。盡管申請?zhí)?010/0326828中公開的方法增加了速度，但其所得的高背景迫使在染色時間和低背景水平之間進(jìn)行權(quán)衡，類似于擴(kuò)散驅(qū)動的過程，這往往進(jìn)行過夜以基本上完全去除背景和改善自動指紋檢測方法和定量方法的精度和/或準(zhǔn)確性。
本文公開的組合物和方法使用利用電驅(qū)動染色方法實現(xiàn)的減少的染色時間并且還提供實質(zhì)性改善的染色背景(其是低且均勻的)。本文公開的組合物和方法對于例如在電泳指紋檢測方法和定量方法中使用的半自動化或全自動化電泳分離過程是有用的并且在其中使用。
一個實施方案是包含含有染色溶液(即溶解于合適的溶劑中的染色劑)的源片和含有合適的溶液例如脫色溶液的一個或多個槽片的電泳染色組合物，其包括其中源片是多個片的實施方案。所述片是主要地非纖維素材料或纖維素共混物的通常平面的、流體可滲透的接觸片。染色溶液和/或脫色溶液可以吸附到流體可滲透的接觸片，或可以吸附到可與接觸片的非基質(zhì)接觸側(cè)接觸的儲存層。在一個結(jié)構(gòu)中，源片是包含染色劑的源電泳染色組合物。在另一個結(jié)構(gòu)中，槽片是包含脫色溶液的槽電泳染色組合物。
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