[發明專利]肽聚糖的生物學測定

有效

• 申請號: 201480018300.0
• 申請日: 2014-03-25
• 公開（公告）號: CN105122059B
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發明（設計）人: 皮埃爾·拉諾;馬克·比蓋特;羅塞利納·伯納德;法布里斯·阿蘭;馬蒂厄·卡龐捷;安納斯·丹伊斯;赫拉·海新納-伽爾比
• 申請（專利權）人: 羅蓋特兄弟公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 金海霞;楊青

1.一種測定艾考糊精或麥芽糖糊精樣品中的肽聚糖(PGN)的方法，該方法包含：

a)通過聲處理、加熱和/或堿性化處理該樣品；

b)使處理后的樣品或其稀釋物與重組細胞接觸，該重組細胞表達外源TLR2受體(Toll樣受體2)和直接依賴與該TLR2受體相關的信號傳導路徑的報道基因，所述報道基因編碼有色或熒光蛋白質或編碼其活性可用或不用底物來測量的蛋白質；

c)測量該報道基因信號；和

d)使用PGN的量與該報道基因信號的強度之間的對應性的校正曲線來確定該樣品中的PGN的量，其中所述PGN的量與該報道基因信號強度之間的對應性的校正曲線是用PAM₃Cys-Ser-(Lys)4三鹽酸鹽校正，以按活性PGN的當量單位來表示PGN的量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于通過聲處理、加熱和/或堿性化處理該樣品使得能夠破碎并分解該樣品中所含的PGN，以使得其能活化該TLR2受體。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于處理該樣品使得能夠生成主要具有約120kDa大小的PGN。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于該報道基因是分泌的堿性磷酸酶。

5.根據權利要求1述的方法，其特征在于該細胞是HEK-Blue^TM hTLR2細胞系的細胞。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于活性PGN的當量單位的量與該報道基因信號強度之間的對應性的校正曲線是用源自選自以下的細菌的PGN來制備：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus)、枯草桿菌(Bacillussubtilis)和酸熱脂環酸芽孢桿菌(Alicyclobacillus acidocaldarius)。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于活性PGN的當量單位的量與該報道基因信號強度之間的對應性的校正曲線是用源自選自以下的細菌的PGN來制備：金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌和酸熱脂環酸芽孢桿菌。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于該方法包含使用源自選自以下的細菌的PGN制備該校正曲線的預備步驟：金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、枯草桿菌和酸熱脂環酸芽孢桿菌。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于該方法包含使用PAM₃Cys-Ser-(Lys)4三鹽酸鹽制備校正曲線的預備步驟。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于如果需要，稀釋該樣品，以生成對應于該校正曲線的線性部分的報道基因信號。

11.根據權利要求1所述的方法，其特征在于該樣品是艾考糊精溶液的樣品。

12.一種用于測定葡萄糖聚合物樣品中的肽聚糖(PGN)的試劑盒，該試劑盒包含：

重組細胞，其表達外源TLR2受體(Toll樣受體2)和直接依賴與該TLR2受體相關的信號傳導路徑的報道基因，所述報道基因編碼有色或熒光蛋白質或編碼其活性可用或不用底物來測量的蛋白質；和

PGN標準品；

用于預處理該樣品的溶液，

任選地使用說明，

該試劑盒還包含PAM₃Cys-Ser-(Lys)4三鹽酸鹽。

13.根據權利要求12所述的試劑盒，其特征在于所述PGN標準品源自選自以下的細菌：金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、枯草桿菌和酸熱脂環酸芽孢桿菌。

14.根據權利要求12所述的試劑盒，其特征在于所述PGN標準品源自選自以下的細菌：金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌和酸熱脂環酸芽孢桿菌。