[發明專利]EPS8抗腫瘤CTL表位肽及其應用

在審

• 申請號: 201410857491.1
• 申請日: 2013-12-23
• 公開（公告）號: CN104497124A
• 公開（公告）日: 2015-04-08
• 發明（設計）人: 李玉華;周煒均
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京市盈科律師事務所 11344
• 代理人: 馬麗麗

本申請是申請日為2013年12月23日、申請號為201310717092.0、發明名稱為EPS8抗腫瘤CTL表位肽及其應用的中國發明專利申請的分案申請。

技術領域

本發明屬于生物化學領域中的多肽技術領域，具體涉及一種EPS8來源的抗腫瘤CTL表位肽及其在制備治療腫瘤藥物中的應用。

背景技術

惡性腫瘤是新世紀人類的第一殺手。手術、放療及化療等傳統治療方法對某些腫瘤尤其是晚期惡性腫瘤的治療效果尚不理想。近年來，細胞毒性T淋巴細胞(Cytotoxic?T?Lymphocyte,CTL)在抑制腫瘤中的作用受到極大重視，如何有效激發CTL介導的特異性細胞免疫應答，發揮抗腫瘤效能，已經成為當今腫瘤治療性多肽疫苗研制領域的一個重要課題。

腫瘤抗原的發現及其CTL表位的鑒定是腫瘤特異性免疫治療以及腫瘤治療性多肽疫苗研制的重要前提。表皮生長因子受體通路底物No.8(Epidermal?Growth?Factor?Receptor?pathway?substrate?No.8，EPS8)是表皮生長因子受體(EGFR)重要的激酶活性底物之一。近年研究顯示，EPS8在多種實體瘤(如宮頸癌、結直腸癌、垂體瘤、口腔鱗癌、胰腺導管癌、乳腺癌、甲狀腺癌、食管癌及惡性膠質瘤等)及血液系統腫瘤(如多發性骨髓瘤、急性髓系白血病、混合系白血病等)的組織及細胞中表達異常升高，而在正常組織表達很低或無表達。進一步的研究顯示，EPS8通過調控細胞周期促進腫瘤細胞的增殖，通過參與細胞偽足的形成及與肌動蛋白的相互作用促進腫瘤細胞的轉移，通過影響腫瘤細胞對化療藥物的耐受性與患者的預后相關(Li?Y*,Xue?T,He?Y,Du?J.A?novel?oncoprotein?Eps8:new?target?for?anti-cancer?therapy.Future?Oncology.2013(Accepted))。此外，本課題組在前期的實驗研究中發現，重組小鼠rmHis-Eps8蛋白疫苗可有效誘導荷4T1乳腺癌小鼠產生特異性抗腫瘤免疫應答，抑制小鼠體內腫瘤細胞的增殖，延長其生存時間，而對小鼠腦、心、肝、腎、小腸、附睪組織無明顯的毒性作用。(He?YJ,Zhou?J,Li?Y*,et?al.Eps8vaccine?exerts?prophylactic?antitumor?effects?in?a?murine?model:a?novel?vaccine?for?breast?carcinoma.Mol?Med?Rep.2013Aug；8(2):662-8)。因此，EPS8是腫瘤診斷和抗腫瘤治療的新靶點，在腫瘤免疫治療中具有巨大潛力。

免疫原性弱和免疫耐受極大地限制了天然CTL表位在腫瘤治療性多肽疫苗中的應用，因此，有效提高天然CTL表位的免疫原性并打破機體的免疫耐受成為腫瘤治療性多肽疫苗發展的關鍵。在眾多腫瘤治療性多肽疫苗的增強策略中，對天然CTL表位進行分子改造被認為是最行之有效的方法之一。由于CTL表位與主要組織相容性復合體(MHC)-Ⅰ類分子的結合是誘導CTL免疫應答的關鍵因素，而CTL表位與MHC-Ⅰ類分子結合的重要基礎是錨定殘基，因此，可通過改變錨定殘基或其相鄰位置的氨基酸殘基以達到增強免疫原性而不影響特異性的目的。研究發現，在九肽CTL表位中，第二位及第九位為HLA-A2.1分子的主要錨定位點，二位為Leu或Met，九位為Leu、Val或Ile，能將表位與MHC結合的能力提高10～100倍，而在一位引入Tyr則可依靠其側鏈苯環的疏水作用以及酚羥基的氫鍵作用增強表位肽與HLA分子的相互作用。

本申請主要采用理論和實驗相結合的方法，修飾并初步鑒定出與MHC-Ⅰ類分子具有強結合力并有效誘導抗腫瘤免疫應答的EPS8來源的候選CTL表位肽及其類似物。

發明內容

本發明所要解決的一個技術問題是針對上述的技術現狀而提供一種腫瘤抗原EPS8來源的HLA-A*0201限制性CTL表位，該表位能夠以高親和力結合HLA-A*0201分子，所形成的復合物穩定，能夠誘導肽特異性的CTL免疫應答，表現為刺激肽特異性CTL分泌高水平的IFN-γ并對腫瘤細胞產生特異性殺傷效應。

本發明所要解決的另一個技術問題是針對上述的技術現狀而提供一種在腫瘤原EPS8來源的HLA-A*0201限制性CTL表位肽在制備治療腫瘤藥物中的應用。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：