[發明專利]一種抗QKI-5單克隆抗體及其制備與應用

有效

• 申請號: 201410842403.0
• 申請日: 2014-12-25
• 公開（公告）號: CN105777901B
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 惠靜毅;宗峰陽;李鈉
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 郭婧婧;許亦琳

本發明提供了一種抗QKI?5的單克隆抗體，所述單克隆抗體由保藏在中國典型培養物保藏中心的保藏號為CCTCC C2014228的雜交瘤細胞分泌。所述單克隆抗體特異性高，僅僅識別QKI?5，對QKI的另外兩種異構體QKI?6和QKI?7完全不識別，效價高，方便實驗，且易于分離純化。所述單克隆抗體的成功構建為把QKI?5開發成為監測腫瘤發生發展重要診斷方式提供了極具意義的工具，也給科研人員在實驗過程中排除非特異性識別干擾提供了便利的手段。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種抗QKI-5單克隆抗體及其制備與應用。

背景技術

單克隆抗體(Monoclonal Antibody，McAb)即單個B淋巴細胞克隆所分泌的抗體。抗體主要由機體的B淋巴細胞合成，每個B淋巴細胞有合成一種抗體的遺傳基因。當機體受抗原刺激時，抗原分子上的許多決定簇分別激活各個具有不同基因的B細胞。被激活的B細胞分裂增殖形成該細胞的子孫，即克隆。如果選出一個合成一種抗體的細胞進行培養，就可得到由單細胞經分裂增殖而形成細胞群，即單克隆。單克隆細胞所合成的抗體即為單克隆抗體。

單克隆抗體的特點是：理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結合的特異性強、便于人為處理和質量控制，并且來源容易。

單克隆抗體技術是現代生命科學研究的重要工具，其在基因和蛋白質的結構和功能研究方面有著不可或缺的作用，成為解決生物學和醫學等許多重大問題的重要手段，在人類和動物的免疫學診斷方面至今仍有著無可替代的重要作用。

單克隆抗體技術的基本原理為：小鼠受到外界抗原刺激后可誘導免疫反應，產生相應的抗體，這一職能是由B淋巴細胞來承擔。腫瘤細胞在體外培養條件下可以無限傳代，是永久細胞。把小鼠的骨髓瘤細胞與經過免疫的小鼠脾細胞在聚乙二醇等介導下發生融合，融合后的雜交瘤細胞具有兩種細胞的特性，一方面可以分泌特異性的抗體，一方面也具備了腫瘤細胞無限增殖的能力、可在體外培養條件下或移植到體內無限增殖，從而分泌大量單克隆抗體。

免疫方法和篩選抗原是決定能否獲得高親和力、能識別天然抗原表位的單抗的重要因素。

QKI蛋白是一種重要的RNA結合蛋白，對胚胎和出生后的個體發育至關重要。QKI蛋白有三種異構體，根據其mRNA的3’非翻譯區(3’-UTR)的長度分別命名為QKI-5，QKI-6和QKI-7。這三種蛋白在細胞內的定位各不相同，其中QKI-5主要定位于細胞核內，QKI-6在細胞核和細胞質均有分布，而QKI-7則主要定位于細胞質。此外，這三種異構體的表達還具有組織、細胞的特異性。神經細胞中主要含有QKI-6和QKI-7，而表皮細胞中則主要 是QKI-5。這三種異構體調控基因表達的分子機制并不相同。已有的報道發現癌組織中QKI的表達量往往低于癌旁組織，并且癌細胞往往是表皮細胞轉化而來，故通過檢測細胞、組織中的QKI-5的含量來預測、診斷癌癥的發生發展，為癌癥的早期診斷提供新的依據，并提供可能的治療方案。另外，最新的研究結果顯示，肺癌組織主要表達QKI-5，在肺癌早期病人中，QKI低表達的病例生存率顯著降低，提示了QKI-5可以作為一個重要的預后標記物。因此，運用新的技術手段研究QKI-5在腫瘤診療方面的作用，具有深厚的潛力和深遠的影響。

但是，由于QKI的三種異構體在N端保守，僅僅是C端十幾個氨基酸有所不同，目前常見的商業化QKI抗體很難特異性地識別其中一種異構體，而往往是對三種異構體均有反應。

發明內容

本發明的目的在于提供一種僅僅特異性識別QKI-5的單克隆抗體及其制備與應用，所述抗體特異性高，僅僅識別QKI-5，對另外兩種異構體QKI-6和QKI-7完全不識別，效價高，方便實驗，且易于分離純化。所述單克隆抗體的成功構建為把QKI-5開發成為監測腫瘤發生發展重要診斷方式提供了極具意義的工具，也給科研人員在實驗過程中排除非特異性識別干擾提供了便利的手段。