[發明專利]殺鮭氣單胞菌活疫苗制劑和凍干疫苗制品的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201410837255.3
• 申請日: 2014-12-29
• 公開（公告）號: CN104560851B
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 江蘇海健前沿生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 殷紅梅

殺鮭氣單胞菌活疫苗制劑和凍干疫苗制品的制備方法及應用，屬于漁用細菌性基因缺失減毒活疫苗技術領域。其包括一株殺鮭氣單胞菌野生毒株的無標記基因缺失減毒突變菌株HTAsf?5307，以及通過該菌株制備的殺鮭氣單胞菌活疫苗、制備方法和應用。本發明提供的殺鮭氣單胞菌減毒活疫苗株因缺失了殺鮭氣單胞菌毒株的芳香族氨基酸合成相關基因的部分片段，和部分三型分泌相關編碼基因的部分片段，相對于其野生毒株具有明顯的低毒性和產品安全性，同時，可有效地保護免疫魚免受殺鮭氣單胞菌致病毒株的侵害。該活疫苗免疫效果顯著，在實際應用中能很好地防治殺鮭氣單胞菌引發的病害。

技術領域

本發明涉及一種殺鮭氣單胞菌活疫苗制劑和凍干疫苗制品的制備方法及應用，具體涉及基于一種殺鮭氣單胞菌無標記基因缺失減毒突變株的制劑及應用，該疫苗株主要用于由殺鮭氣單胞菌引發的魚類疥瘡病的免疫防治，屬于水產養殖動物病害免疫防控領域，具體屬于漁用細菌性基因缺失減毒活疫苗技術領域。

背景技術

殺鮭氣單胞菌（Aeromonas salmonicida）屬于氣單胞菌科（Aeromonadaceae）氣單胞菌屬（Aeromonas），是一種革蘭氏陰性短桿菌，最適生長溫度為18~22℃。由殺鮭氣單胞菌引起的癤瘡病（Furuneulosis）是鮭科魚類養殖業的重大病害（Janda J.M. et al., 2010,Clin Microbiol Rev, 23:35-73.），嚴重影響了世界范圍內以大西洋鮭（Salmo salar）為代表的鮭魚類養殖業的健康發展，是海水魚類養殖業中最為重大的風險之一，世界動物衛生組織（World Organisation for Animal Health，OIE）將其列為重點疫病目錄。除此該菌還能感染絕大部分其他鮭鱒魚類，如，太平洋鮭（Pacific salmon）、楓葉鮭、虹鱒（Rainbowtrout）、銀鮭（Coho salmon）等，和非鮭鱒魚類，如金魚（Goldfish）、鯉（Common carp）、鯰（Catfish）和大菱鲆（Turbot）等，給水產養殖業造成了嚴重的經濟損失（Bergh ?., 2008,Fish Diseases. Science Publishers, pp.239-277.）。

鑒于殺鮭氣單胞菌對水產養殖業造成的重大危害，人們在過去近40年的以鮭魚養殖業為代表的水產養殖業可持續發展中，不斷探索針對殺鮭氣單胞菌病害的高效防治策略。以抗生素為核心的化學療法曾伴隨著世界范圍內以海水魚類養殖為代表的水產養殖業發展歷程，為病害防治和減少病害損失發揮過積極貢獻。但這種病害防控策略所導致抗藥病原快速蔓延，水產品安全問題（藥物殘留）和環境污染的負面影響日趨嚴重。抗生素的大量使用和濫用所帶來的負面影響已經給世界范圍水產養殖業的健康和可持續發展產生了嚴重制約。

而基于魚類免疫系統的預防性疫病防控措施則是一種非常有效的符合環境友好的病害防控策略。疫苗作為一種預防性手段，因其可以使宿主長久地抵抗病原體的感染而被引入水產養殖業。從魚疫苗的研發歷程和當前發展趨勢看，魚類疫苗大致可以分為四種類型：1）以病原體全細胞為基礎的滅活疫苗；2）以全細胞為基礎的減毒活疫苗；3）以具有抗原活性的亞細胞成分為基礎的亞單位疫苗；4）以抗原活性成分的編碼基因為基礎的DNA疫苗。目前，國際上已商品化的魚類細菌疫苗基本為滅活疫苗（Bj?rn E. B., et al., 2013,Fish Shellfish Immunol, 35:1759-1768）。

與滅活疫苗、亞單位疫苗和DNA疫苗相比，由于病原體減毒活菌具有完整的免疫原組分，較滅活病原菌具有更強的細胞免疫潛能，可誘導產生更有效的免疫應答反應；同時，其仍然保持的侵染性可使減毒活菌可通過口服和浸泡途徑免疫，以此開發的減毒活疫苗在經濟上更具競爭性。由于減毒活疫苗兼具高效、給藥方便、經濟低廉等綜合優勢，這對于需要免疫成千上萬數量的水產養殖業來說具有現實的商業應用潛力。