[發(fā)明專利]殺鮭氣單胞菌活疫苗制劑和凍干疫苗制品的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410837255.3
• 申請(qǐng)日: 2014-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN104560851B
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 不公告發(fā)明人
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇海健前沿生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32104
• 代理人: 殷紅梅

1. 一株殺鮭氣單胞菌野生毒株的無標(biāo)記基因缺失減毒突變菌株HTAsf-5307，分類命名為Aeromonas salmonicida，已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2014年10月29日，保藏編號(hào)為：CCTCC M 2014527。

2.如權(quán)利要求1所述殺鮭氣單胞菌野生毒株的無標(biāo)記基因缺失減毒突變菌株，其特征是：其缺失了殺鮭氣單胞菌野生毒株的芳香族氨基酸合成基因aroC的部分片段，所述aroC的部分片段具體如SEQ ID NO.1所示；和Ⅲ型分泌系統(tǒng)編碼基因aopN、acr1及ascN的部分片段，所述aopN、acr1及ascN的部分片段具體如SEQ ID NO.2所示。

3.權(quán)利要求1所述菌株制備的殺鮭氣單胞菌活疫苗，其特征是：包括疫苗發(fā)酵培養(yǎng)液，和疫苗發(fā)酵培養(yǎng)液經(jīng)凍干后得到的凍干疫苗。

4.如權(quán)利要求3所述殺鮭氣單胞菌活疫苗，其特征是：所述凍干疫苗凍干前，即疫苗發(fā)酵培養(yǎng)液是含有活菌的磷酸緩沖液，活菌的含量為45-80億/毫升。

5.權(quán)利要求3所述殺鮭氣單胞菌活疫苗制劑，其特征是：將所述凍干疫苗和在藥理上可接受的配體復(fù)配后得到殺鮭氣單胞菌活疫苗制劑，其菌體細(xì)胞濃度為10⁴~10⁸CFU/mL。

6.如權(quán)利要求5所述殺鮭氣單胞菌活疫苗制劑，其特征是：所述藥理上可接受的配體為無菌生理鹽水；無菌生理鹽水配方為：NaCl 9g/L，pH為6.5-8.0。

7.權(quán)利要求3所述殺鮭氣單胞菌活疫苗的制備方法，其特征是步驟為：

疫苗發(fā)酵培養(yǎng)液的制備：用接種環(huán)挑取保存于TSA培養(yǎng)基上減毒突變菌株HTAsf-5307，接種于裝有液體LB或TSB種子培養(yǎng)基的搖瓶中振蕩培養(yǎng)；所述LB或TSB培養(yǎng)基中加入生長(zhǎng)因子，所述生長(zhǎng)因子為苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，添加量均為5-40mg/L；然后再取生長(zhǎng)旺盛的菌液接種于新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)；用無菌磷酸鹽緩沖液洗滌，離心，最后用無菌磷酸鹽緩沖液重懸，即得到疫苗發(fā)酵培養(yǎng)液；發(fā)酵培養(yǎng)培養(yǎng)溫度均為20~22?C；

凍干疫苗的制備：取疫苗發(fā)酵培養(yǎng)液所得制劑在凍干機(jī)內(nèi)進(jìn)行凍干；在凍干制備過程中，添加有凍干保護(hù)劑；所述凍干保護(hù)劑包括海藻糖、脫脂奶粉和甜菜堿；它們的添加量是每100mL活疫苗中添加1-5g的海藻糖、1-10g的脫脂奶粉和0.1-2mM甜菜堿，充分混勻后，放入已滅菌處理的凍干機(jī)內(nèi)進(jìn)行凍干，水分降至4%以下即得凍干疫苗。

8.權(quán)利要求5所述殺鮭氣單胞菌活疫苗制劑在制備預(yù)防魚類所患由殺鮭氣單胞菌導(dǎo)致的大西洋鮭癤瘡病上藥物中的應(yīng)用。

9.如權(quán)利要求8所述應(yīng)用，其特征在于：所述魚類具體包括大西洋鮭、太平洋鮭、虹鱒、斑馬魚和大菱鲆。