[發明專利]一種輔酶Q10的提取制備方法

有效

• 申請號: 201410837053.9
• 申請日: 2014-12-29
• 公開（公告）號: CN104529738A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 馮建偉;張述智;徐權漢;相雪;夏偉;張浩;許團輝;王曉麗;劉思喜;韓瑞超
• 申請（專利權）人: 青島中仁動物藥品有限公司
• 主分類號: C07C50/28
• 分類號: C07C50/28;C07C46/10
• 代理公司: 青島高曉專利事務所37104
• 代理人: 趙映蓉

1.一種輔酶Q₁₀的提取制備方法，其特征在于具體包括以下工藝步驟：

(1)細菌發酵：將培養用水加入透光容器后，加入培養用水重量0.1％的消毒劑，攪拌均勻、靜置后過濾得滅菌清液；向滅菌清液中加入培養用水重量1％的細菌培養劑，充分溶解、攪勻后得培養液，向培養液中加入沼澤紅假單胞菌種液并攪拌均勻；把已接種好的沼澤紅假單胞菌分裝至發酵容器中，留氣室、置于室外有光照處，每日攪拌十次以上，15-40℃條件下培養2-5天至生物量達10⁸時采收；

(2)離心濃縮：將采收的沼澤紅假單胞菌菌液用碟式離心機以1000L/h的速率連續離心使離心率達95％以上，得到濃縮菌泥；

(3)破壁處理：將濃縮菌泥放入細胞破碎機進行破壁處理，控溫10℃以下，壓力10000psi，反復兩次，使菌體破壁率達90％以上，以得到破壁菌體；

(4)皂化處理：向每150kg的破壁菌體中加入焦性沒食子酸700g，氫氧化鉀5kg，甲醇35kg和純凈水50L，混合均勻后放入反應釜中回流30min，然后迅速冷卻至室溫；

(5)萃取回收：向反應釜中加入石油醚萃取2次，每次加入的石油醚的體積數與步驟(4)中破壁菌體的質量數的比值為1:1，然后快速攪拌5分鐘，在溫度為20℃條件下靜置1h后分離萃取液即石油醚層，將兩次萃取液合并回收；將反應釜升溫至65℃，經揮發回收殘留石油醚，反應釜中所剩物即為輔酶Q₁₀粗制品；

(6)純化處理：具體步驟包括：

Ⅰ.將輔酶Q₁₀粗制品用無水乙醇溶解后制成體積百分比濃度為20％的輔酶Q₁₀乙醇溶液；

Ⅱ.將輔酶Q₁₀乙醇溶液加入反應釜中，每100L輔酶Q₁₀乙醇溶液中加入HZ816樹脂30kg，持續攪拌30min，使輔酶Q₁₀充分被HZ816樹脂吸附，然后分離取出HZ816樹脂；

Ⅲ.將吸附有輔酶Q₁₀的HZ816樹脂用丙酮解析洗脫2次。

Ⅳ.將兩次丙酮洗脫液進行合并，減壓到常壓101325Pa，回收丙酮后得到輔酶Q₁₀濃縮液；

Ⅴ.將濃縮液在0℃條件靜置過夜24小時有結晶體析出，回收結晶體經干燥后得純品，純度達93.4％。

2.根據權利要求1所述的輔酶Q₁₀的提取制備方法，其特征在于步驟(1)中培養用水為河水、池水、井水或自來水；消毒劑為重量比是漂粉精：硫酸鋁鉀：碳酸鈉＝2：5：0.5配制而成；細菌培養劑為重量比是醋酸鈉：硫代硫酸鈉：碳酸氫鈉：磷酸二氫鉀：氯化鈣：硫酸鎂＝7：3：1.3：0.1：(0.04-0.05)：(0.01-0.02)配制而成；培養液與球形紅假單胞菌種液的重量比為3：0.9—1.1。

3.根據權利要求1所述的輔酶Q₁₀的提取制備方法，其特征在于步驟(1)中還可選用球形紅假單胞菌、脫氫假單胞菌、脫氮付球菌或莢膜紅細菌替代沼澤紅假單胞菌。