[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于石墨烯氧化物芯片DNA解旋酶的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410832817.5
• 申請(qǐng)日: 2014-12-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104611419A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高力;時(shí)海霞;李琴;李嬈祺;周陽(yáng);陳克平;張春霞;連超群
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12Q1/34
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種基于石墨烯氧化物芯片DNA解旋酶的檢測(cè)方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）制備具有氧化石墨烯點(diǎn)陣的玻片；

（2）一端氨基修飾另一端FAM標(biāo)記的單鏈DNA與互補(bǔ)的單鏈DNA變性雜交后，連接到具有石墨烯氧化物點(diǎn)陣的玻片上，反應(yīng)完成后洗滌，掃描記錄玻片上DNA標(biāo)記的FAM熒光強(qiáng)度F₁；

（3）DNA解旋酶檢測(cè)：

ATP為10?mM時(shí)，將不同數(shù)量的DNA解旋酶加入到步驟（2）處理過(guò)的玻片上，作用30?min以下，PBS沖洗，掃描記錄玻片上DNA標(biāo)記的FAM熒光強(qiáng)度F₂。

2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟（1）是將1ml石墨烯氧化物溶液點(diǎn)在氨基修飾的玻片上，干燥后，用超純水沖洗，然后加入1ml?EDCI和sulfo-NHS混合物后在室溫下12h。

3.如權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述石墨烯氧化物溶液的濃度為0.3?mg/ml；EDCI溶液的濃度為0.6?nM；sulfo-NHS溶液的濃度為6.0?nM。

4.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟（2）的具體方法為：一端氨基修飾另一端FAM標(biāo)記的單鏈DNA序列，與互補(bǔ)的單鏈DNA按照1:1的比例混合后，放置在雜交盒中和步驟（1）制備的玻片進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)12h，用PBS洗去多余的探針。

5.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：當(dāng)DNA解旋酶作用后FAM熒光強(qiáng)度F₂/DNA解旋酶作用前FAM熒光強(qiáng)度F₁比值接近于0時(shí)，?說(shuō)明溶液中存在DNA解旋酶。