[發明專利]肉丸中水楊酸的檢測方法

在審

• 申請號: 201410811423.1
• 申請日: 2014-12-23
• 公開（公告）號: CN104634777A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 許穩健;張鴻;孫珽銓
• 申請（專利權）人: 深圳力德力諾檢測應用系統有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 濟南魯科專利代理有限公司 37214
• 代理人: 曹玉琳

技術領域

本發明屬于食品添加劑理化檢驗技術領域，具體涉及肉丸中所含水楊酸的檢測方法。

背景技術

防腐劑是一類化學試劑，常用于防止食品、飲料和化妝品等細菌的生長。水楊酸為有機酸類防腐劑，在酸性條件下具有較強的抗真菌性質。水楊酸在肉丸加工過程中增強肉的凝固，增強肉制品的脆性和彈性，富有較好的口感。但是，由于水楊酸對消化道的刺激作用，以及對肝臟、腎臟的損傷作用，肉丸中添加水楊酸是法律法規所禁止的，必須開發可靠的方法對在肉丸加工過程中違法添加水楊酸的行為進行檢測查處。

水楊酸的檢測方法很多，國際分析化學家協會AOAC給出了水楊酸含量測定的分光光度法。經乙醇提取水楊酸，在pH?3.0的緩沖液中，Fe³⁺與水楊酸生成穩定絡合物，以FeCl₃為顯色劑，測定樣品中水楊酸的含量，過程中FeCl₃不能過量，以免影響結果準確性。文獻報道在酸性條件下，用乙醇萃取醋中的水楊酸，經提純蒸發后，利用水楊酸與三氯化鐵的顯色反應進行定量的檢測。該方法簡便易行，準確可靠，檢出限量達10ppm。香港衛生當局曾利用該方法在浙醋中查出含有水楊酸，并測得含量達30ppm。亦有報道利用Br2與2，7-二氯熒光素反應，使2，7-二氯熒光素熒光猝滅。加入水楊酸后，反應體系熒光增強，檢出限2.0μg/L，具有良好選擇性。

在水楊酸的測定方法中，一般采用甲醇、乙醇、乙醇、乙腈等有機溶劑提取，但提取率不高，而且需要復雜的樣品預處理過程，并且要借助復雜的儀器設備，適合在現場對食品進行快速檢測的方法不多。

目前，未見快速檢測肉丸中水楊酸含量的相關報道，主要是因為水楊酸和蛋白質的結合非常緊密，很難從肉丸中將其萃取出來。因此亟需開發一種在肉丸中檢測水楊酸的快速、簡便、靈敏、可靠的檢測方法，為政府監管部門的專項提供現場監督檢測的技術手段，有利于擴大抽查覆蓋面、維護消費者的合法利益。

發明內容

為了解決現有技術的不足，本發明利用胃蛋白酶和胰蛋白酶對肉丸中的蛋白質進行水解，再利用有機溶劑無水乙醇浸提，使得樣品中的水楊酸釋放出來,結合Fe³⁺離子絡合顯色的方法，通過紙片法定性檢測水楊酸,提供了在肉丸中檢測水楊酸的快速、簡便、靈敏、可靠的檢測方法，解決肉制品中水楊酸抽提難題。

本發明采用如下技術方案實現：

肉丸中水楊酸的檢測方法：

稱取肉丸5.0g充分研碎后加入3.0-6.0mL?PBS緩沖溶液，混合均勻，將1片胃蛋白酶片和1片多酶片(含0.3g胰蛋白酶)研碎加入到上述混合液中，酶解20-40min；加入無水乙醇2-3mL浸提10-15min，離心得到上清液，檢測樣品中水楊酸的含量。

利用分光光度法或HPLC法對上清液中的水楊酸進行定量檢測。

制備FeCl₃檢測試紙：利用1.5-2.5mmol/LFeCl₃溶液浸泡濾紙，吹干后得到FeCl₃檢測試紙；

取上述上清液滴加到FeCl₃檢測試紙上進行定性檢測。

優選地，所述FeCl₃檢測試紙使用1.5mmol/L的FeCl₃溶液浸泡制得，PBS緩沖溶液加量為5mL，酶解時間為30min，無水乙醇用量為2mL，浸提時間為15min。

本發明具有的優點和積極效果是：本研究利用酶解輔助萃取能夠很好地使得樣品中的水楊酸釋放出來，再利用有機溶劑無水乙醇浸提，結合Fe³⁺離子絡合顯色的方法，抽提率可達95.8％，能夠有效抽提肉丸中的水楊酸，使得檢測更加靈敏、準確。本發明還提供了預制好的檢測試紙，無需現場配制，提高了工作效率；避免操作人員直接接觸化學藥品，使用安全可靠；無需使用任何儀器和輔助設備，消耗低；靈敏度高，滿足國家檢測標準要求；肉眼對比顏色判斷檢測結果，簡單明了；利用紙片顯色，耗材易處理，減少污染，FeCl₃試紙的檢測靈敏度為4mg/L，基本達到現場檢測要求。

附圖說明

圖1是采用實施例3的方法檢測肉丸中水楊酸的顯色結果；

圖2是采用實施例3TLC的方法檢測肉丸中水楊酸的顯色結果；

圖3是FeCl₃試紙對不同濃度水楊酸檢測顯色情況。

具體實施方式

實施例1

抽提效率實驗?