[發明專利]一種睡蓮組織培養的方法

有效

• 申請號: 201410798205.9
• 申請日: 2015-08-03
• 公開（公告）號: CN104488716A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 王燕;汪一婷;呂永平;牟豪杰;陳志;陳劍平
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

1.一種睡蓮組織培養的方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

1)、培養基的配制：

(1)基本培養基：采用固液雙層培養基，其上層均為無菌蒸餾水；下層為MS固體培養基，其中蔗糖20～30g/L，瓊脂5～9g/L，pH＝5.8；

(2)誘導培養基固體層：MS+TDZ?1.0～3.0mg/L+NAA?0.05～0.5mg/L+活性炭0.2～0.5mg/L；

(3)增殖培養基固體層：MS+6-BA?2.0～4.0mg/L+NAA?0.1～0.5mg/L；

(4)生根培養基固體層：MS+NAA?0.05～0.2mg/L+IBA?0.05～0.2mg/L；

2)外植體的選取與消毒：將睡蓮根莖上的頂芽及側芽周緣修整光滑，清洗并消毒后備用；

3)不定芽的誘導及增殖：將步驟2)消毒處理后的芽在無菌條件下接種于誘導培養基上，經1～2個月后可直接誘導出不定芽，將不定芽轉接到增殖培養基上進一步進行增殖；

4)生根培養：將步驟3)增殖獲得的不定芽在無菌條件下切割后轉接到生根培養基上，培養15～25天后生根；

5)移栽：將步驟4)生根后睡蓮植株從培養基中取出并清洗，然后移栽至泥水槽中栽培。

2.根據權利要求1所述的睡蓮組織培養的方法，其特征在于：在所述步驟1)中，所述的培養基包括基本培養基和組培各階段培養基的組分具體為：

(1)基本培養基：采用固液雙層培養基，其上層均為無菌蒸餾水；下層為MS固體培養基，其中蔗糖20～30g/L，瓊脂5～9g/L，pH＝5.8；

(2)誘導培養基固體層：MS+TDZ?2.0mg/L+NAA?0.5mg/L+活性炭0.2mg/L；

(3)增殖培養基固體層：MS+6-BA?3.0mg/L+NAA0.2mg/L；

(4)壯苗培養基固體層：MS+NAA0.1mg/L+IBA?0.1mg/L。

3.根據權利要求1所述的睡蓮組織培養的方法，其特征在于：在所述步驟2)中，所述的消毒處理是：挖取睡蓮根莖去除葉片后將頂芽、側芽連同部分根莖組織切下，用鋒利的刀片將芽體周緣修整光滑后用飽和洗衣粉溶液浸泡中20～60min，然后再用自來水沖洗干凈，接著依次在體積比為70％的酒精、有效氯濃度為1％的次氯酸鈉溶液和0.1％的升汞中分別浸泡0.5～1min、4～8min和4～6min，最后用無菌水沖洗3～5次。

4.根據權利要求1所述的睡蓮組織培養的方法，其特征在于：在所述步驟3)中，所述的不定芽的誘導和增殖為：將消毒處理后的芽體接種于誘導培養基的固體層中誘導不定芽萌出，將誘導出的不定芽切下后轉接到增殖培養基中進行增殖。