[發明專利]一種多肽菌素、其制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201410794864.5
• 申請日: 2014-12-18
• 公開（公告）號: CN104672302A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 呂志成;楊賽;鮑隆
• 申請（專利權）人: 山東深海生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/20;A61K38/08;A61P37/04;A61P31/04;A61P31/14;A23K1/17
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 蔣常雪

技術領域

本發明涉及一種多肽菌素、其制備方法及其應用。具體而言，本發明提供具有免疫提高促進、細胞組織修復和/或抗菌促生長的作用的多肽菌素、其制備方法及其在制備抗生素替代品或畜禽業的應用。

背景技術

自Moore等(1946)首次報道，在飼料中添加抗生素能明顯提高肉雞的日增重以來，人們對抗生素的研究和應用越來越廣泛，先后有60余種抗生素應用于畜牧業，在動物疾病防治、提高飼料利用率、促進畜禽生長等方面發揮了重要作用。但隨著抗生素的大量使用，特別是不科學地濫用，細菌耐藥性和藥物殘留等問題日益突出，引起世界各國政府及業內人士的高度重視。2006年，歐盟全面禁止了抗生素飼料添加劑的應用。我國是畜禽生產大國，由于抗生素在我國養禽業的大量使用，特別是不科學地濫用，導致藥物殘留超標等問題，出口量僅占生產量的0.9％～1.2％。

養殖業中抗生素濫用的危害主要包括：

1.導致細菌產生抗藥性

雖然耐藥性因子的傳遞頻率只有10-6，但由于細菌數量大、繁殖快，在這一頻率下，仍造成抗藥菌株的擴散、蔓延，而且可以使一種細胞產生多種耐藥性。抗生素濫用導致耐藥菌株增加，而抗生素飼料添加劑長期、大量不合理使用是其中一條主要原因。畜牧業中，大腸桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌等過去并不嚴重或較少發生的細菌病，現已上升為家禽的主要傳染病，這與長期濫用抗生素有直接關系。

2.造成畜禽機體免疫力下降

大量抗生素在其被攝入機體后，會隨血液循環分布到淋巴結、腎、肝、脾、胸腺、肺和骨骼等各組織器官，動物機體的免疫能力就被逐漸削弱，人和動物慢性病例增多，一些可以形成終生堅強免疫的疾病頻頻復發。抗生素還會導致抗原質量降低，直接影響免疫過程，從而對疫苗的接種產生不良影響。

3.引起畜禽內源性感染和二重感染

抗生素雖都有自己的抗菌譜，但基本都難以避免在作用于病原菌同時會影響機體內有益菌群生長，尤其是長期、大量使用，會造成機體內菌群失調，微生態平衡破壞。潛伏在體內的有害菌趁機大量繁殖，而引起內源感染。另外一種情況，抗生素會消滅體內敏感菌，在體內一些微生物附著點上造成大量空位，為外界耐藥病菌乘虛而入提供機會，從而造成外源感染。二重感染也是由于施用大量抗生素殺滅某種細菌時，破壞微生態平衡，另外一種或多種內源或外源病菌隨即再次感染機體造成的。

4.在畜產品和環境中造成殘留

抗生素被吸收到體內后，分布到幾乎全身各器官，但大多數抗生素都難以透過機體的幾個“天然屏障”，如血腦屏障、血睪屏障等。抗生素在內臟器官尤其是肝臟內分布較多，而在肌肉和脂肪中分布較少。抗生素的代謝途徑多種多樣，但大多數以肝臟代謝為主，經膽汁、由糞便排出體外；也會通過泌乳和產蛋過程殘留在乳和蛋中。一些性質穩定的抗生素被排泄到環境中后仍能穩定存在很長一段時間，從而造成環境中的藥物殘留。這些殘存的藥物，通過畜產品和環境慢慢蓄積于人體和其它植物體中，最終以各種途徑匯集于人體，導致人體產生大量耐藥菌株，失去對某些疾病的抵抗力，或因大量蓄積而對機體產生毒害作用。

因此，在全球經濟一體化的時代，要提高我國畜禽產品的國際競爭力，抗生素安全問題及對策研究已成為畜牧工作者的研究方向，尋找無公害的抗生素替代品已成為畜牧工作者迫在眉睫的課題。

發明內容

本發明提供了一種可作為抗生素替代品的多肽(以下稱為多肽菌素)，其具有免疫提高促進、細胞組織修復和/或抗菌促生長的作用。

本發明提供的多肽菌素的氨基酸序列為：Gly-Lys-Ser-Gln-Glu-Tyr-Leu-Gly。

此外，本發明還提供了上述多肽的制備方法，其包括根據Fmoc-固相多肽合成法合成粗品多肽，優選的是，所述方法還包括使用反相高效液相色譜對所述粗品多肽進行純化。

具體而言，所述Fmoc-固相多肽合成法中，以二氯樹脂(2-Chlorotrityl?Chloride)為固相載體，HOBt(1-羥基-苯并-三氮唑)/TBTU(苯并三唑四甲基四氟硼酸)/DIEA?(N,N'-二異丙基乙胺))為催化劑，二甲基甲酰胺DMF為溶劑和清洗劑，三氟乙酸(TFA)/1,2-乙二硫醇(EDT)/H₂O為切割劑，進行所述粗品多肽的合成。

其中在合成時，所述方法使用分別使用下述氨基酸進行合成：

Gly:Fmoc-Gly-OH；

Lys:Fmoc-Lys(Boc)-OH

Ser:Fmoc-Ser(tBu)-OH

Gln:Fmoc-Gln(Trt)-OH