[發明專利]一種基于多孔硅的高血壓血清學的檢測方法

在審

• 申請號: 201410774551.3
• 申請日: 2014-12-16
• 公開（公告）號: CN104535502A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 呂小毅;呂國棟;賈振紅;莫家慶;溫浩;林仁勇;盧曉梅
• 申請（專利權）人: 新疆大學;新疆醫科大學第一附屬醫院
• 主分類號: G01N21/25
• 分類號: G01N21/25;G01N21/3577
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 夏晏平

技術領域

本發明涉及免疫學檢測領域，特別涉及一種基于多孔硅的高血壓血清學的檢測方法。

背景技術

高血壓是一種嚴重影響人類健康的慢性疾病，是導致動脈粥樣硬化、心腦血管疾病、腎臟疾病、器官衰竭甚至死亡的重要危險因素，是人群中最為常見的慢性非傳染性疾病，也是導致人類死亡的主要疾病，具有較高的病死率。在全世界廣泛流行，無論發達國家還是發展中國家均具有極高的患病率，我國高血壓呈現出快速上升的趨勢。臨床治療藥物分為利尿藥、血管緊張素轉換酶抑制劑和血管緊張素II受體阻滯劑等幾類。個體化治療是有效控制高血壓病情的關鍵，但目前的個體化給藥一般通過根據患者服藥后的表觀療效結合醫生的經驗進行給藥劑量和給藥時間的摸索，存在極大的人為誤差。

腎素-血管緊張素-醛固酮系統與高血壓具有密切的關系。血管緊張素I基本沒有生物學活性，而是經血管緊張素轉化酶（Angiotensin?Converting?Emzyme,?ACE）剪切C-末端兩個氨基酸殘基而形成血管緊張素II。血管緊張素II具有高效的收縮血管作用，從而使血壓升高；血管緊張素II也能刺激腎上腺皮質分泌醛固酮。醛固酮能促進腎臟對水和鈉離子的重吸收，繼而增加體液容量，升高血壓。目前多數高血壓藥物針對該系統進行調控，如：血管緊張素轉化酶抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑和腎素抑制劑等幾類。對于該系統的關鍵因子進行檢測對于指導高血壓個體化給藥具有重要意義。該系統的關鍵因子包括血管緊張素、腎素和醛固酮等。

另外，心鈉肽和內皮素與高血壓治療也有密切關系。心鈉肽是一種由心房合成、貯存和分泌的活性多肽，又稱心房利鈉因子(ANF)或心房利鈉肽(ANP)。具有強大的利鈉、利尿、舒張血管、降低血壓和對抗腎素－血管緊張素系統和抗利尿激素作用。內皮素是由21個氨基酸組成的生物活性多肽。內皮素具有強烈的收縮冠狀動脈、腎小動脈;內皮素是迄今所知最強的縮血管物質，其作用時間持久，刺激心鈉素的釋放，提高全身血壓;抑制腎素釋放等作用。

目前，臨床針對血管緊張素、腎素、醛固酮、心鈉肽和內皮素五種指標的檢測方法有放射免疫分析法、發光免疫分析法、高效液相色譜法和酶聯免疫吸附法等幾種。這些方法一次僅能檢測一種指標，通量較低，且具有檢測周期長、靈敏度低或有放射污染等缺點。

目前報道的基于多孔硅微腔的生物傳感器很多，檢測方法包括：反射光譜的檢測和拉曼、熒光光譜的檢測。

CN101710118A公開了一種基于多孔硅三元結構微腔的光學免疫檢測方法，該方法采用基于計算機精確控制的電化學腐蝕方法制備多孔硅微腔，其中多孔硅微腔內上、下的Bragg(布拉格)結構由三種電流密度交替進行電化學腐蝕而形成，其特征在于對于不同條件制備的多孔硅微腔進行編碼可以實現多元檢測，如果是一元檢測則不需要編碼，使抗體或抗原在多孔硅三元結構微腔的孔洞里結合，多元檢測中抗原或抗體的種類利用多孔硅微腔的編碼進行標識，而通過生物反應前后的光譜峰位變化進行檢測樣品中相應的抗原或抗體濃度，所述檢測方法包括以下步驟：

1)抗原或抗體固定在多孔硅微腔的孔洞里，如果是需要編碼的多元檢測，那么一種編碼的多孔硅微腔對應固定一種待測生物分子的特異性抗原或抗體，沖洗未結合的分子并封閉多孔硅微腔里的未結合生物分子的空白鍵位，記錄測定固定有抗原或抗體的多孔硅微腔光譜；

2)不同多孔硅微腔與不同濃度待測溶液發生反應，使抗原-抗體在多孔硅微腔的孔洞里特異性結合，反應后進行沖洗，記錄多孔硅微腔光譜及編碼確定種類和濃度。

這種光學免疫檢測方法不僅兼具多孔硅和光子帶隙結構傳感器的諸多優異性能，而且結構穩定性很好，通過編碼檢測技術更是可以實現多元檢測。此外，由于采用的制備方法較為簡單，價格相對低廉，有一定的商業應用前景。

CN103558184A涉及一種基于多孔硅非標記實時在線檢測霍亂毒素的方法。該方法利用多孔硅為傳感基底，在多孔硅表面修飾疏水基團后，通過疏水性相互作用固定脂質體和單唾液酸神經節苷脂，當樣品中含有霍亂毒素時，單唾液酸神經節苷脂(GM1)特異的結合毒素分子，利用多孔硅的反射干涉光譜，經過傅里葉紅外轉化后，實時非標記檢測多孔硅有效薄膜的厚度變化，對霍亂毒素進行定量和定性檢測。該方法可以對霍亂毒素實時在線檢測，最低檢測限為1nM，該傳感基底可以重復使用。