[發明專利]一種由功能肽R11修飾的基因載體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201410766122.1
• 申請日: 2014-12-11
• 公開（公告）號: CN104530188A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 劉克海;趙文芳;朱曼曼;胡靜;呂慧;毛媛
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12N15/63;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 金重慶

1.一種雙功能肽，其特征在于，所述的雙功能肽的氨基酸序列為：Arg-Gly-Asp-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val。

2.一種基因載體，其特征在于，它是由權利要求1所述的雙功能肽和聚乙烯亞胺衍生物偶聯而成，所述的聚乙烯亞胺衍生物是普郎尼克修飾的聚乙烯亞胺即普郎尼克P123-聚乙烯亞胺，所述的普郎尼克與聚乙烯亞胺的摩爾比為1:1-1:20，所述的聚乙烯亞胺的分子量范圍為600-70000Da。

3.根據權利要求2所述的基因載體，其特征在于，所述的普郎尼克與聚乙烯亞胺的摩爾比為1:1-1:10。

4.根據權利要求2所述的基因載體，其特征在于，所述的雙功能肽與聚乙烯亞胺衍生物的摩爾比為2:1。

5.權利要求2-4任一所述的基因載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)合成權利要求1所述的多肽；

(b)普郎尼克P123除水，加入兩倍摩爾量的三光氣，溶于無水甲苯和無水二氯甲烷的混合液中，室溫下磁力攪拌過夜；除去溶劑后再用無水甲苯和無水二氯甲烷溶解，加入N-羥基琥珀酰亞胺，磁力攪拌下逐滴加入無水三乙胺；反應完全后過濾，除去溶劑，將殘渣溶于乙酸乙酯中，離心取上清液，旋蒸除去乙酸乙酯，冷卻固化后得活化的普郎尼克P123；

(c)將活化后的普郎尼克P123和除水后的聚乙烯亞胺PEI分別溶于無水二氯甲烷，再將所得的兩液同時加入無水二氯甲烷低液中，氮氣飽和后磁力攪拌過夜，離心取上清液，旋轉蒸發得到普朗尼克P123-聚乙烯亞胺；

(d)將表面活性劑溶解于二甲基亞砜DMSO溶液中，步驟(a)所制備的雙功能肽和步驟(c)所制備的普郎尼克P123-聚乙烯亞胺分別溶解于PBS溶液；攪拌普郎尼克P123-聚乙烯亞胺溶液，邊攪拌邊滴加表面活性劑溶液，室溫下反應30min，通過凝膠色譜柱除去未結合的表面活性劑，得到馬來酰亞胺化的P123-PEI液；將雙功能肽液按2倍摩爾比加入到馬來酰亞胺化的P123-PEI溶液中，4℃搖動反應過夜，離心凍干。

6.權利要求2-4任一所述的基因載體與DNA形成的復合物。

7.根據權利要求6所述的復合物，其特征在于，所述的DNA含報告基因、抗癌基因和/或細胞因子基因。

8.權利要求1所述的多肽以及權利要求2-4任一所述的基因載體在制備基因治療的藥物中的應用。