[發(fā)明專利]茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡便檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410749917.1
• 申請(qǐng)日: 2014-12-10
• 公開（公告）號(hào): CN104483429A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣迎;劉新;魯成銀;汪慶華;陳紅平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡便檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

按GB?2760-2011《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》，茶葉是不許添加任何外來添加劑，包括任何色素，但是茶葉中的外源添加合成色素雖然是非常規(guī)性質(zhì)量安全問題，在違法成本相對(duì)低廉的現(xiàn)實(shí)情況下，違法添加以達(dá)到改善外觀等質(zhì)量指標(biāo)的茶葉安全事件但還是時(shí)有發(fā)生。如，2004年上海的一些茶葉店和大型茶葉批發(fā)市場(chǎng)發(fā)現(xiàn)了用色素染出來的浙江麗水碧螺春。2005?年質(zhì)檢總局就查出了不法分子用工業(yè)顏料炒出“鉛鉻綠茶”。2007?年天臺(tái)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局查處了200kg添加色素茶葉。2010年青島沂南廢茶葉摻上香精和色素做成飯店賓館免費(fèi)茶。2012年寶應(yīng)成茶加色素變“現(xiàn)炒現(xiàn)賣正宗綠楊春新茶”。2012年重慶的紅茶出口市場(chǎng)因在茶葉發(fā)酵過程中加入非茶葉原料和大量色素已陷入絕境。

合成色素的檢測(cè)目前國內(nèi)外合成色素檢測(cè)方法主要有聚酰胺吸附法、液液分配法、羊毛染色法、基體固相分離法、固相萃取法、濁點(diǎn)萃取法等，相對(duì)應(yīng)結(jié)合分光光度法、毛細(xì)管電泳法、極譜法、微柱法、高效液相色譜法和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等檢測(cè)方法。如，1999年丁暉利用HPLC測(cè)定果味型碳酸飲料中日落黃、檸檬黃；2006年Jochen?K等采用HPLC法測(cè)定魚子和魚子醬中的色素；2007年Katerina?S?M?等采用HPLC-DAD檢測(cè)食品中13種水溶性色素；2008年，?Yoshioka?N使用短柱測(cè)定了飲料和糖果中的40種人工合成色素；2009年，邢文靜等用HPLC測(cè)定了橙汁中亮藍(lán)等5種色素；2010年顧慧瑩等用UPLC測(cè)定飲料中胭脂紅等6種色素；2011年，Constantinos?K等用HPLC測(cè)定調(diào)味品中對(duì)位紅和蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ等5中染料；2011年李瑾瑾等結(jié)合HPLC-VWD及HPLC-MS/MS分別測(cè)定了螺螄和飲料中的14和12種色素；2011年陳岑等用HPLC-TOF-MS測(cè)定了硬糖、飲料中36種色素和調(diào)味料中19種色素；2012年龍巍然等用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定飲料中酸性紅92、亮黑等色素；2013年Schummer?C用UPLC-MS/MS法測(cè)定調(diào)料和含辣椒制品中蘇丹紅Ⅰ~Ⅳ；2013年Guo?J用離子液體分散液液微萃取測(cè)定軟飲、糖果、果膠等中的亮藍(lán)；2014年Qi?P用HPLC-FLD測(cè)定含辣椒制品中的羅丹明B；2014年Khodadoust?S用紫外可見光光譜法測(cè)定水中甲基紅。

應(yīng)該說食品中合成色素的檢測(cè)方法研究不少，但是一是食品基質(zhì)方面，多涉及硬糖、飲料等基質(zhì)相對(duì)簡單的食品，對(duì)于較為復(fù)雜基質(zhì)的食品也集中于肉類、奶酪等高脂肪、高蛋白質(zhì)的種類，作為多年生木本植物及后續(xù)加工過程繁復(fù)的茶葉的相關(guān)研究則缺失，而且因其茶葉樣品基質(zhì)背景異常豐富，高天然色素類、高小分子基質(zhì)干擾又使得茶葉中外源添加合成色素的檢測(cè)方法不可能照搬飲料、糖果或者肉類、奶酪等的檢測(cè)方法。另外，本發(fā)明涉及的檸檬黃、莧菜紅等水溶性合成色素在ESI源下離子化不理想，因此近幾年來主要依靠LC-MS等儀器技術(shù)進(jìn)行幾十種合成色素檢測(cè)的已有研究中，也未涉及本發(fā)明內(nèi)容。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡便檢測(cè)方法的技術(shù)方案。

所述的茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡便檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟：

1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

單一色素標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取水溶性合成色素標(biāo)準(zhǔn)品，用50%甲醇稀釋，逐一配制成色素1000mg/L的單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液，備用；

色素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：根據(jù)各色素在儀器上的響應(yīng)值，逐一吸取單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液分別注入同一容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用，使用前用50%甲醇稀釋成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液；

2）試料制備：取不少于100g茶葉樣品，放入粉碎機(jī)中粉碎，制成待測(cè)樣，放入分裝容器中備用；

3）提取：準(zhǔn)確稱取1.00g茶葉放人15mL具塞管中，加入10mL堿性試劑，在振蕩器中上快速振蕩30s，后用超聲輔助提取20min，取上清液1mL加入20uL乙酸，過0.45umPTFE濾膜后再進(jìn)行測(cè)定；

4）色譜分析：由自動(dòng)進(jìn)樣器吸取10μL標(biāo)準(zhǔn)混合溶液(或樣品)注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以樣品溶液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比較定量；