[發明專利]一種核殼結構的聚合物微球及其制備和應用

有效

• 申請號: 201410749219.1
• 申請日: 2014-12-09
• 公開（公告）號: CN105732891B
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發明（設計）人: 張麗華;劉鍵熙;楊開廣;李森武;吳瓊;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C08F222/38
• 分類號: C08F222/38;C08F220/06;C08F8/30;G01N1/40;G01N1/34
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司21002
• 代理人: 馬馳

技術領域

本發明涉及富集糖肽，具體地說是一種單分散核殼結構聚合物納米粒子及其制備和在糖肽富集中的應用。

背景技術

糖蛋白作為一類重要的翻譯后修飾蛋白，在生物免疫、信號轉導及腫瘤發生等生物學過程中發揮著重要的作用。因此，糖肽的發現與鑒定在疾病的診斷和蛋白質組學領域意義重大。在眾多技術中，利用質譜技術對于研究糖蛋白糖基化位點信息的分析及糖型結構的歸屬已經成為現在研究糖肽的主要方法。但由于糖蛋白豐度低、糖肽占總肽段比例小，因此在用質譜分析檢測時往往被高豐度的非糖肽掩蓋，因此在分析之前，需要對糖肽進行選擇性富集。

目前最常用的糖蛋白富集方法包括親水作用色譜、凝集素親和色譜，酰肼及硼酸功能化材料等。其中，親水作用色譜(HILIC)是根據糖肽與非糖肽之間親水性差異將其分開。此方法步驟簡便快捷，避免了糖鏈結構的破壞，且富集產物與質譜兼容。因此，親水作用色譜在糖肽選擇性富集領域受到了人們的關注。目前，在利用親水作用色譜用于糖肽富集的材料中，使用較為廣泛的是糖類和磺酸類功能基團材料。目前主要是利用這些功能分子接枝在基質材料的表面(Z Xiong,Z Liang Zhao,F Wang,J Zhu,H Qin,R Wu,W Zhang H Zou,Chem.Commun.,2012,48,8138–8140；G Huang,Z Xiong,H Qin,J Zhu,Z Sun,Y Zhang,X Peng,J Ou,H Zou,Analytica Chimica Acta,2014,809,61-68)。然而所采用的后修飾接枝策略效率較低并且步驟極其繁瑣。有研究利用點擊化學的方式在硅球上進行半胱氨酸的修飾制備親水作用色譜進行糖肽富集(L Ren,Y Liu,M Dong,Z.Liu.J.Chromatogr.A.2009,1216,8421-8425；Z Lin,J Pang,H Yang,Z Cai,L Zhang,G.Chen,Chem.Commun.2011,47,9675-9677；Y Liu,L Ren,Z Liu.Chem.Commun.2011,47,5067-5069)，雖半胱氨酸鍵合效率提高且糖蛋白富集效果較好，但硅球顆粒較大，其比表面積較小，而且硅球本身具有非特性吸附強，因此限制此類材料對于糖肽的富集。

發明內容

針對以上不足，本發明提供一種簡單、省時、易行、產物重現性高的聚合反應方法，得到的產物顆粒為納米級，形狀規整，單分散性好，表面含有大量氨基和羧基親水性基團。利用該聚合物材料作為富集材料，對糖肽的分離富集以及可以兼容后續的質譜直接分析，從而解決了糖蛋白質組學樣品的分析困難。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

步驟一：將單烯類功能單體、多烯類交聯劑和引發劑等與反應溶液，一同加入到250mL的圓底燒瓶中，超聲1分鐘，使得加入的試劑溶解形成均勻的溶液。之后將Dean-Stark接收器接于圓底燒瓶之上，接收器上接冷凝管，之后通氮氣15分鐘，加入磁力攪拌子，磁力攪拌子保持300rad/min速度。反應裝置放在油浴鍋中均勻緩慢加熱，反應體系溫度由室溫在10～60分鐘內升到60～140℃。維持60～140℃條件下，在1～4小時內將反應體系中的溶劑蒸餾掉30-70％，停止反應，冷卻至室溫。之后使用高速離心機用10000rad/min的速度離心，去除上清液，加入反應溶液洗三遍，之后用四氫呋喃、丙酮、無水乙醚各洗滌3遍后，50℃真空干燥箱內真空干燥24小時。

步驟二：在25mL的圓底燒瓶中，裝上冷凝管，加入反應溶劑，加入步驟一中得到的聚合物核顆粒、半胱氨酸、引發劑等，超聲1分鐘，使得加入的試劑以及顆粒溶解形成均勻分散在溶液中。之后通氮氣15分鐘，加入磁力攪拌子，磁力攪拌子保持300rad/min速度。將反應裝置均勻緩慢加熱，在30min內升溫至60～80℃。維持60～80℃條件下反應4-48小時，停止反應，冷卻至室溫。之后使用高速離心機用10000rad/min的速度離心，去除上清液，加入反應溶液洗三遍，之后用四氫呋喃、丙酮、無水乙醚各洗滌3遍后，50℃真空干燥箱內真空干燥24小時。