[發明專利]一種淫羊藿總黃酮的提取和分離純化工藝

在審

• 申請號: 201410739922.4
• 申請日: 2014-12-08
• 公開（公告）號: CN104435047A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 敖云霞
• 申請（專利權）人: 敖云霞
• 主分類號: A61K36/296
• 分類號: A61K36/296
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 程新敏

技術領域

本發明涉及一種淫羊藿總黃酮的提取和分離純化工藝，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍｂｒｅｖｉ-ｃｏｒｎｕＭａｘｉｍ、箭葉淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ.ｓａｇｉｔｔａｔｕｍ（Ｓｅｂ.ｅｔＺｕｃｃ.）Ｍａｘｉｍ、柔毛淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ?ｐｕ-ｂｅｓｃｅｎｓ?Ｍａｘｉｍ或朝鮮淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ?ｋｏｒｅａｎｕｍ?Ｎａｋａｉ的干燥葉，，味辛甘、性溫，具有補腎陽，強筋骨、祛風濕功效，現代藥理學研究表明，淫羊藿在免疫、生殖、核酸代謝、心血管以及抗衰老方面具有多種藥效。

發明內容

本發明的目的是：提供一種淫羊藿總黃酮的提取和分離純化工藝，能大大提高總黃酮的得率和含量，以克服現有技術的不足。

本發明的技術方案

一種淫羊藿總黃酮的提取和分離純化工藝，采用Ｌ９正交設計法，以浸膏得率和總黃酮含量為檢測指標優選提取工藝；用ＡＢ-８型大孔吸附樹脂柱進行分離，乙酸乙酯、正丁醇萃取純化。

前述的一種淫羊藿總黃酮的提取和分離純化工藝中，最佳提取工藝為淫羊藿葉的粗粉中加入２７倍量水，浸泡２ｈ后，煎煮３次，每次１ｈ；淫羊藿提取液上ＡＢ-８型大孔吸附樹脂柱分離，再用乙酸乙酯、正丁醇萃取。

由于采用上述技術方案，與現有技術相比，現有技術中關于淫羊藿總黃酮提取方法的研究報道眾，常見的方法有水煎煮法、乙醇回流法、索氏提取法、超聲提取法，本研究按這些方法提取淫羊藿總黃酮，再經大孔吸附樹脂柱分離，得到淫羊藿總黃酮的含量相差不大，雖然以６０％乙醇為溶媒時提取的淫羊藿總黃酮含量較高，但含量均低于５０％，為提高淫羊藿總黃酮的含量，考慮到水具有廉價環保等特點，實驗時采用水提，過大孔吸附樹脂柱分離后，再用乙酸乙酯、正丁醇進行萃取的方法，對提取物進行了精制，結果發現，經萃取后所得淫羊藿總黃酮的含量提高到６１％，表明，大孔吸附樹脂柱分離法和萃取法相結合可以達到純化淫羊藿總黃酮的目的。

附圖說明

附圖1為提取工藝因素水平表；

附圖2為淫羊藿總黃酮提取工藝正交試驗與結果示意圖；

附圖3為提取工藝方差分析表；

附圖4為重現性試驗示意圖；

附圖5為不同洗脫劑對黃酮量的影響示意圖；

附圖6為萃取后的結果圖；

附圖7為萃取后總黃酮含量示意圖。

具體實施方式

下面結合附圖對本發明作進一步的詳細說明，但不作為對本發明的任何限制。

本發明的實施例：

１　儀器及試藥

ＵＶ-２４０１型紫外可見分光光度計（上海棱光技術有限公司），日本島津ＡＹ-１２０電子分析天平，日本東京Ｎ１０００ＤＮＡ旋轉蒸發儀，ＨＨＳ-２１-６電熱恒溫水浴鍋（杭州艾普儀器設備有限公司）。淫羊藿葉購于貴陽市三橋中藥材市場，淫羊藿苷對照品為成都曼斯特生物有限科技公司產品，批號ＭＵＳＴ-１００７０９０１,ＡＢ-８型大孔吸附樹脂（天津市海光化工有限公司），９５％乙醇、乙酸乙酯（ＡＲ，上海申博化工有限公司），正丁醇（ＡＲ,上海申博化工有限公司），甲醇（ＡＲ，天津市大茂化工試劑廠），純化水（實驗室自制）。

２　方法與結果

２.１　提取工藝的優選

２.１.１　因素水平的選擇

為確定淫羊藿總黃酮的最佳提取工藝，以加水量、浸泡時間、煎煮時間和煎煮次數為影響因素，按每個因素３水平，選用Ｌ９（３^４）正交表安排試驗，結果見附圖１,以浸膏得率和總黃酮含量為考察指標,選取最佳工藝。

２.１.２　標準曲線的繪制

精密稱取淫羊藿苷對照品１０.０ｍｇ，置于１００ｍｌ量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得濃度為１００.０ｍｇ／Ｌ的淫羊藿苷對照品溶液。精密吸取對照品溶液０.５０、１.００、２.００、３.００、４.００、５.００ｍｌ分別置于２５ｍｌ量瓶中，用甲醇稀釋至刻度,以甲醇為空白對照，用紫外分光光度計在２７０ｎｍ處測定吸光度,以吸光度Ａ對淫羊藿苷濃度Ｃ進行回歸，得到回歸方程為：Ａ＝０.０３６３Ｃ?＋０.０７０７，ｒ＝０.９９９８，結果表明在２.００～２０.００ｍｇ／Ｌ范圍內，線性關系良好。

２.１.３　樣品的制備和測定結果