[發(fā)明專利]一種油田化學劑的生物毒性評價方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410736313.3
• 申請日: 2014-12-05
• 公開（公告）號: CN105713952B
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張霖;姚新武;廖莎;樊亞超;師文靜
• 申請（專利權(quán)）人: 中國石油化工股份有限公司;中國石油化工股份有限公司撫順石油化工研究院
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12R1/63;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種油田化學劑生物毒性評價方法，包括如下內(nèi)容：（1）發(fā)光菌復蘇：將發(fā)光菌用氯化鈉溶液配制成菌懸液，于冰水浴中復蘇；（2）同步化培養(yǎng)：將復蘇菌懸液接種于活化培養(yǎng)基中，進行活化培養(yǎng)；活化培養(yǎng)后期，在菌體培養(yǎng)液中加入生長抑制劑，進行同步培養(yǎng)；經(jīng)同步培養(yǎng)后，收集菌體細胞；（3）毒性評價：用氯化鈉溶液將菌體細胞配制成具有一定發(fā)光量的菌懸液，并添加發(fā)光促進劑，用于毒性評價分析。本發(fā)明方法通過菌種復蘇、同步化培養(yǎng)、穩(wěn)態(tài)篩選等方式獲得具有較高發(fā)光穩(wěn)定性的供試發(fā)光菌；在毒性檢測過程中，加入發(fā)光促進劑，從而削弱了個體發(fā)光差異，保證了毒性評價結(jié)果的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于環(huán)保技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種對油田化學劑的生物毒性評價方法。

背景技術(shù)

隨著世界范圍內(nèi)環(huán)境保護法律法規(guī)的日益嚴格及公眾環(huán)境意識的日益強烈，油田化學劑（主要包括鉆井液添加劑及體系、完井液添加劑及體系、油田污水處理劑等）的環(huán)境保護評價問題受到了普遍關(guān)注和重視。在國外，如美國、英國、加拿大、挪威、荷蘭等都制定了有關(guān)油田化學劑（主要是鉆井液及其廢棄物）的環(huán)境保護指標。在我國，油田化學劑的生物毒性問題日益受到重視，已經(jīng)開展了廢棄鉆井液對海洋生物的毒性測試，并初步建立了油基鉆井液毒性評價的實驗程序，但關(guān)于油田化學劑生物毒性測試方法的研究卻起步較晚。油田化學劑生物毒性測試方法的研究始于九十年代初期，迄今為止，尚無統(tǒng)一的油田化學劑生物毒性測試方法標準與分級標準。

1995年國家環(huán)保局頒布了《水質(zhì)急性生物毒性發(fā)光細菌法》即國標GB/T 15441-1955，并于1995年3月1日開始在全國實行。它是測定水質(zhì)急性生物毒性的標準方法。中國石油環(huán)境監(jiān)測總站以《水質(zhì)急性生物毒性發(fā)光細菌法》為基礎(chǔ)，參照EPA糠蝦生物試驗法，建立了利用發(fā)光細菌法測定鉆井液及添加劑生物毒性的測試方法和生物毒性分級方法，并以此為基準起草并建立了中國石油天然氣集團公司企業(yè)標準Q/SY111—2007，即《油田化學劑、鉆井液生物毒性分級及檢測方法 發(fā)光細菌法》。

發(fā)光細菌法是基于毒性物質(zhì)對發(fā)光細菌的發(fā)光度的抑制效果而設(shè)計的一種評價方法，具有操作簡便，檢測周期短，易于現(xiàn)場操作等特點，被多個行業(yè)廣泛采用。CN201110090246.9公開了一種發(fā)光菌毒性的測定方法，該方法包括以下步驟：1)菌種活化：將明亮發(fā)光桿菌的凍干粉溶解，接種到斜面上傳代3次后可用；2)菌種的培養(yǎng)：將傳代好的菌種用接種環(huán)接種到液體培養(yǎng)基，20℃，180rpm培養(yǎng)12h；3)菌液的平衡：移取適量菌液到20mL3％ NaCl溶液中，控制光值測定范圍在50-500萬之間，20℃條件下攪拌40min；4)加樣及發(fā)光強度檢測：將攪拌了40min的菌液用連續(xù)進樣器加入200μL到800μL的3％ NaCl空白及800μL濃度梯度的3％ NaCl污染液，加樣后立即在旋渦混勻器上混勻2min，20℃條件下，靜置15min后將樣品管置入熒光檢測器中測定發(fā)光強度；5)雙交錯對照法計算樣品對發(fā)光強度的抑制率。CN201010537039.9公開了一種發(fā)光細菌菌種的長期保存、快速復蘇的方法。通過開發(fā)專門的細菌凍存培養(yǎng)基和復蘇溶液，實現(xiàn)發(fā)光細菌菌種的長期保存和快速復蘇，既節(jié)省了測試成本，也大大縮短了毒性測試的時間，為化學污染物的快速毒性測試提供了可能。

目前油田化學劑的生物毒性等級判斷主要是基于化學劑對發(fā)光細菌的發(fā)光量抑制程度。由于發(fā)光細菌具有自主的代謝及條件反射機制，發(fā)光量作為生物毒性唯一的檢測指標，其受菌體生長代謝及環(huán)境影響很大，準確量化的難度很大，因此發(fā)光細菌檢測方法的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性不高。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種油田化學劑生物毒性評價方法。該方法通過菌種復蘇、同步化培養(yǎng)、穩(wěn)態(tài)篩選等方式獲得具有較高發(fā)光穩(wěn)定性的供試發(fā)光菌菌懸液；在毒性檢測過程中，加入發(fā)光促進劑，從而削弱了個體發(fā)光差異，保證了毒性評價結(jié)果的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

本發(fā)明油田化學劑生物毒性評價方法，包括如下內(nèi)容：

（1）發(fā)光菌復蘇：將發(fā)光菌用氯化鈉溶液配制成菌懸液，于冰水浴中復蘇；