[發明專利]雪蓮干細胞的分離培養方法及在制備抗衰老產品中的應用

有效

• 申請號: 201410715007.1
• 申請日: 2015-08-04
• 公開（公告）號: CN104498425A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 陳海佳;王一飛;葛嘯虎;馬巖巖;王小燕;羅二梅;舒輝萍
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A61K8/98;A61Q19/08;A61Q19/00
• 代理公司: 廣州圣理華知識產權代理有限公司 44302
• 代理人: 頓海舟;陳業勝

1.一種雪蓮干細胞的分離培養方法，其特征在于，取天山雪蓮幼嫩葉片，對其消毒后首先利用固體培養基分離天山雪蓮干細胞，再利用液體培養基對其進行傳代配養；所述固體培養基含有無機鹽、維生素、氨基酸、生長素、糖類和活性炭；液體培養基含有無機鹽、維生素、氨基酸、生長素、糖類和添加物。

2.根據權利要求1所述的分離培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)取雪蓮幼嫩葉片，清洗、消毒；

(2)將消毒后的雪蓮葉片接種至固體培養基上；所述固體培養基含有無機鹽、維生素、氨基酸、生長素、糖類、活性炭和瓊脂；培養溫度為25-29℃，pH值為6.0-6.5，培養時間為20-25天，得到來源于形成層的雪蓮干細胞；

(3)將來源于形成層的雪蓮干細胞轉移至液態培養基中培養，所述液體培養基含有無機鹽、維生素、氨基酸、生長素、糖類和添加物。

3.根據權利要求2所述的分離培養方法，其特征在于，在步驟(2)所述接種之前，先將消毒后雪蓮幼嫩葉片切成約0.5cm*0.5cm大小，接種時，使葉背面與培養基接觸，每瓶1片；

步驟(2)所述無機鹽為硝酸鉀、硫酸鎂、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸銅、氯化鈣、碘化鉀、氯化鈷、磷酸二氫鈉或硼酸中的一種以上；各物質的含量為：硝酸鉀2450-2500mg/L，硫酸鎂122-124mg/L，硫酸錳11-13mg/L，硫酸鋅2.0-3.0mg/L，硫酸銅0.03-0.05mg/L，氯化鈣112-114mg/L，碘化鉀0.7-0.75mg/L，氯化鈷0.024-0.026mg/L，磷酸二氫鈉132-135mg/L，硼酸2.8-3.0mg/L；

維生素為肌醇、硫胺類、煙酸、L-抗壞血酸或檸檬酸中的一種以上；各物質的含量為：肌醇210-230mg/L，硫胺類19-21mg/L，煙酸1.6-2.2mg/L，L-抗壞血酸52-55mg/L，檸檬酸75-85mg/L；

氨基酸為L-天冬氨酸、L精氨酸、甘氨酸或脯氨酸中的一種以上；各物質的含量為：L-天冬氨酸135-145mg/L，L精氨酸160-180mg/L，甘氨酸78-85mg/L，脯氨酸118-126mg/L；

生長素為α-萘乙酸，含量為1.8-3.0mg/L；

糖類為蔗糖或果糖，含量為10.0-12.0mg/L；

活性炭的含量為450-550mg/L；

瓊脂的含量為3.6-3.8mg/L；

步驟(3)所述無機鹽為硝酸鉀、硫酸鎂、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸銅、氯化鈣、碘化鉀、氯化鈷、磷酸二氫鈉或硼酸中的一種以上；

各物質的含量為：硝酸鉀992-996mg/L，硫酸鎂180-184mg/L，硫酸錳22-26mg/L，硫酸鋅10-12mg/L，硫酸銅0.3-0.5mg/L，氯化鈣72-76mg/L，碘化鉀0.3-0.6mg/L，氯化鈷0.03-0.036mg/L，磷酸二氫鈉126-131mg/L，硼酸2.0-2.5mg/L；

維生素為肌醇、硫胺類、煙酸、L-抗壞血酸或檸檬酸中的一種以上；各物質含量為：肌醇194-220mg/L，硫胺類20-23mg/L，煙酸3-5mg/L，L-抗壞血酸57-62mg/L，檸檬酸75-83mg/L；

氨基酸為L-天冬氨酸、L精氨酸、甘氨酸或脯氨酸中的一種以上；各物質的含量為：L-天冬氨酸136-142mg/L，L精氨酸172-180mg/L，甘氨酸75.0-85.0mg/L，脯氨酸110.0-115.0mg/L；

生長素為α-萘乙酸，含量為3.0-5.0mg/L；

糖類為蔗糖或果糖，含量為32.0-34.0mg/L；

添加物為麥飯石顆粒和硒礦石顆粒，麥飯石顆粒60.0-80.0mg/L，硒礦石顆粒60.0-80.0mg/L。

4.利用權利要求1或2的分離培養方法制備雪蓮干細胞提取物的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將權利要求1或2所述的分離培養方法獲得的雪蓮干細胞放大培養；

(2)過濾培養液，將截留的細胞系培養物取出，冷凍、破碎后，過濾，將濾液濃縮即得雪蓮干細胞提取物。