[發(fā)明專利]應(yīng)用伴刀豆凝集素材料富集糖蛋白或糖肽中聚糖的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410680168.1
• 申請日: 2014-11-24
• 公開（公告）號: CN105699497B
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉玉潔;梁鑫淼;于龍;付冬梅;肖遠勝
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發(fā)明涉及凝集素親和材料的應(yīng)用領(lǐng)域，以改性的硅膠為基質(zhì)，以伴刀豆Con A為配基，制備出SG Con A材料，根據(jù)凝集素和聚糖化合物的可逆性結(jié)合作用富集糖蛋白/糖肽，將富集得到的糖蛋白/糖肽經(jīng)過酶解釋放聚糖，經(jīng)過富集得到聚糖，結(jié)合質(zhì)譜的方法鑒定聚糖的結(jié)構(gòu)和構(gòu)型。本發(fā)明應(yīng)用親和固定相富集聚糖化合物，可在高效液相色譜模式和固定相萃取兩種模式下分別富集糖蛋白或者糖肽，并且可將此方法應(yīng)用于實際樣品中聚糖化合物的分離和鑒定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及凝集素親和材料應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，涉及到以硅膠為基質(zhì)，伴刀豆凝集素concanavalin A(Con A)為配基的親和材料SG ConA的制備，以標準糖蛋白和糖肽為富集對象，評價SG Con A的基本性質(zhì)，應(yīng)用SG Con A制備ovalbumin糖蛋白或者糖蛋白經(jīng)過胰蛋白酶(trypsin)酶解得到的糖肽，并用內(nèi)切糖苷酶PNGase F(切除與天冬酰胺Asn相連的聚糖和糖蛋白/糖肽)，酶解糖蛋白/糖肽，釋放糖鏈，經(jīng)過富集得到聚糖，結(jié)合質(zhì)譜表征的方法鑒定聚糖的結(jié)構(gòu)，并將此評價方法應(yīng)用于富集實際樣品中的糖蛋白或者糖肽。

背景技術(shù)

凝集素(Lectin)是指一種從各種植物，無脊椎動物和高等動物中提純的糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白，可以特異性的識別聚糖或者含有聚糖的糖蛋白或者糖肽，并被認為是破譯聚糖構(gòu)型的密碼子(L.Albert,N.Miyako,H.Marina,H.William S.,The Lectin Riddle:Glycoproteins Fractionated from Complex Mixtures Have Similar GlycomicProfiles，A Journal of Integrative Biology,14(2010)487-499.)。因此凝集素親和色譜廣泛應(yīng)用于糖蛋白糖肽的富集中，在蛋白質(zhì)組學的分析中，多種凝集素連用的技術(shù)在復雜樣品的分析中發(fā)揮著卓越的功能(P.Tatiana,W.Eric,H.William S.,H.Marina,Combination of abundant protein depletion and multi-lectin affinitychromatography(M-LAC)for plasma protein biomarker discovery,J.Proteome Res.,6(2007)662–671.；G.Francisca O.,H.Brian B.,P.Katie,G.Carolina,H.Marina,H,William S.,Characterization of Glycoproteins in Pancreatic Cyst Fluid Using aHigh-Performance Multiple Lectin Affinity Chromatography Platform，J.ProteomeRes.,13(2014)289–299.)。

在蛋白質(zhì)的富集策略中，存在自上而下(從蛋白質(zhì)水平)和自下而上(糖肽水平)兩種富集策略，即使富集后的糖蛋白經(jīng)過酶解后仍然存在著大量的非糖肽，使得應(yīng)用自下而上的富集策略更為廣泛(S.Bingyun,R.Jeffrey A.,U.Angelita G.,W.James T.,Y.Xiaowei,L.Biaoyang,H.Leroy,Shotgun Glycopeptide Capture Approach Coupledwith Mass Spectrometry for Comprehensive Glycoproteomics，Mol Cell Proteomics，6(2007)141-149.)。