[發明專利]源自海洋的銅綠假單胞菌制備鼠李糖脂表面活性劑的工藝

在審

• 申請號: 201410665451.7
• 申請日: 2014-11-20
• 公開（公告）號: CN105671103A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 季延濱;李濤;孫學亮
• 申請（專利權）人: 芝王（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/02
• 分類號: C12P19/02;C12R1/385
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明一種生物發酵制備鼠李糖脂的方法。

背景技術

鼠李糖脂是由微生物在特定的生長條件下分泌的一種具有優良表面活性的代謝產物，在石油化工領域，多用于回收巖層中石油，提高石油采收率、清洗儲油罐、消除海域中的石油污染；在農業上，鼠李糖脂生物表面活性劑可增加有機磷殺蟲劑的溶解度，增加粘重土親水性，更有利于肥料和農藥的吸收；此外，由于鼠李糖脂具有一定的抗菌、抗病毒和抗支原體的性能，鼠李糖脂在醫藥工業中經過嚴格處理后作為藥物的輔助劑或替代品，以緩解抗生素給生物體帶來的抗藥作用，具有廣闊應用前景。

源自海洋的銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)CICC10204被用于制備鼠李糖脂，但鼠李糖脂的發酵制備是典型的好氧發酵，多采用銅綠假單胞菌作為菌種進行發酵生產，其菌絲體和多糖的形成過程中，發酵液的黏度迅速上升，使得發酵中后期溶氧性能迅速下降，如加大攪拌，剪切力將增大，則會造成菌絲體的損傷,生產能力下降，嚴重影響了生產效果。如何改善糖脂類生物表面活性劑發酵的溶氧狀況,一直是該領域研究的焦點。雙相發酵技術是指在發酵液中加入一種新的，與水不相溶的體系，該體系是對氧有較高溶解度，但又不溶于水、對微生物無毒的載體(氧載體)，氧載體發酵體系由于具有氧傳遞速度快，能耗低，氣泡生成少，剪切力小等特點，可增加發酵體系的供氧能力，提高發酵產率。

因此在采用銅綠假單胞菌制備鼠李糖脂表面活性劑時提供一種優化的工藝，進一步優化發酵條件，提高底物的轉化率和投料濃度，成為現有技術中亟待解決的問題

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的是提供一種改進的源自海洋的銅綠假單胞菌制備鼠李糖脂表面活性劑的工藝，在研究中為我們驚奇的發現，通過優化發酵工藝，能夠意外的提高銅綠假單胞菌發酵制備鼠李糖脂表面活性劑時的轉化率和投料濃度。

本發明提供了一種利用源自海洋的銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)制備鼠李糖脂表面活性劑的工藝

所述銅綠假單胞菌保藏編號為CICC10204，所述工藝包括以下步驟

(1)孢子培養，將保藏號為CICC10204的銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)作為生產菌種，采用馴化培養基培養得到成熟孢子；

(2)菌體培養，步驟(1)得到的孢子接種到的菌體培養基中進行菌體培養得到菌體培養液；

(3)生物轉化，向步驟(1)中的菌體培養液在發酵培養基中在好氧發酵條件下，持續發酵36-60h得到含有鼠李糖脂的發酵液，通風量(m³/m³·min)為1:(0.6～1.0)；

(4)產物提取，將步驟(3)得到的發酵液通過離心法或膜過濾去除菌體及雜質，再經6K道爾頓超濾膜去除生物大分子和多糖；將收集到的濾液通過蒸發濃縮去除水分，最終獲得鼠李糖脂表面活性劑。

所述的工藝，所述步驟(1)中的馴化培養基的配方為(按質量百分比)：植物油3～6％，濃度為20～50％的乙醇0.1～1％，葡萄糖0.2～0.5％，蛋白胨0.3～0.6％，牛肉膏0.1～0.4％，MgSO₄0.02～0.08％，KH₂PO₄0.1～0.4％，NaCl0.03～0.08％，FeSO₄·7H₂O0.00001～0.00003％，余量為水，培養基pH值7.0～7.2；

所述步驟(2)中的菌體培養基的配方為(按質量百分比)：植物油2～5％，濃度為20％～50％的乙醇0.5～1％，葡萄糖0.2～0.5％，蛋白胨0.3～0.6％，牛肉膏0.1～0.4％，MgSO₄0.02～0.08％，KH₂PO40.1～0.4％，NaCl0.03～0.08％，FeSO₄·7H₂O0.00001～0.00003％，余量為水，培養基pH值7.0～7.2。