[發(fā)明專利]一種Bt蛋白對龜紋瓢蟲的安全性評價方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410647048.1
• 申請日: 2014-11-12
• 公開（公告）號: CN104459095A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙耀;崔金杰;張帥;雒珺瑜;王春義;呂麗敏;李春花
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因作物生態(tài)風(fēng)險評價，具體地說，涉及一種Bt蛋白對龜紋瓢蟲的安全性評價方法。

背景技術(shù)

蘇云金芽孢桿菌(Bacillus?thuringiensis，簡稱Bt)為革蘭氏陽性細(xì)菌屬，是目前世界上應(yīng)用最為廣泛的微生物殺蟲劑之一，它所具有的殺蟲活性的主要來源是該菌株體內(nèi)產(chǎn)生的伴孢晶體蛋白。研究人員將Bt基因?qū)氤Ｒ?guī)作物從而獲得轉(zhuǎn)基因作物，自從1996年首次種植轉(zhuǎn)基因作物以來，轉(zhuǎn)基因作物已在全球得到大面積推廣，全世界的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)創(chuàng)造了巨大的經(jīng)濟(jì)、社會及環(huán)境效益。

轉(zhuǎn)基因作物在整個生育期都能表達(dá)Bt蛋白，可能會使取食轉(zhuǎn)基因作物而存活下來的靶標(biāo)或非靶標(biāo)昆蟲體內(nèi)含有不同程度的Bt蛋白，當(dāng)天敵取食這些體內(nèi)含有Bt蛋白的昆蟲后，Bt蛋白可能會傳遞給天敵，并對天敵造成一定的影響。因此，Bt蛋白對轉(zhuǎn)基因抗蟲作物捕食性天敵昆蟲的安全性逐漸成了研究人員關(guān)注的焦點(diǎn)。

龜紋瓢蟲屬鞘翅目、瓢蟲科、龜紋瓢蟲屬，在我國大部分地區(qū)都有分布，捕食麥蚜、棉蚜、玉米蚜等多種蚜蟲，并取食稻飛虱、木虱和葉螨等多種植食性害蟲，是蚜蟲及棉鈴蟲等害蟲的優(yōu)勢天敵。由于它分布廣，盛夏也能繁殖，在田間取食季節(jié)較長，是一種非常優(yōu)良的天敵資源。

現(xiàn)有的Bt蛋白對轉(zhuǎn)基因抗蟲作物捕食性天敵昆蟲龜紋瓢蟲安全性的評價方法需要先種植轉(zhuǎn)基因作物，待其長到一定階段后再用于飼喂植食性害蟲，植食性害蟲又要取食一段時間后，才能用來飼喂龜紋瓢蟲。以轉(zhuǎn)基因棉為例，如果需要評價轉(zhuǎn)基因棉的Bt蛋白對天敵昆蟲龜紋瓢蟲安全性，需要先種植轉(zhuǎn)基因棉，待其長到苗期后，再往轉(zhuǎn)基因棉上接棉蚜，讓棉蚜取食30至40天后，再用這些棉蚜來飼喂龜紋瓢蟲，來調(diào)查龜紋瓢蟲的生物學(xué)特性是否發(fā)生變化(Zhang,G.,Wan,F.,G.L.,Liu,W.,Guo,J.Transmission?of?Bt?toxin?to?thepredator?Propylaea?japonica(Coleoptera:Coccinellidae)through?its?aphid?preyfeeding?on?transgenic?Btcotton.Environmental?Entomology,2006,35,143-150)。這種評價方法需要通過食物鏈傳遞的方式將Bt蛋白傳遞給龜紋瓢蟲，非常的費(fèi)時費(fèi)工，并且需要耗費(fèi)很多試驗材料(Alvarez-Alfageme,F.,Palinkas,Z.,Bigler,F.,Romeis,J.Development?of?an?early-tier?laboratory?bioassayfor?assessing?the?impact?of?orally-active?insecticidal?compounds?on?larvae?of?Coccinellaseptempunctata(Coleoptera:Coccinellidae).Environmental?Entomology,2012,41,1687-1693)。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種Bt蛋白對龜紋瓢蟲的安全性評價方法，以求更高效準(zhǔn)確的體現(xiàn)Bt蛋白對天敵昆蟲龜紋瓢蟲的安全性。

為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種Bt蛋白對龜紋瓢蟲的安全性評價方法，所述方法包括以下步驟：

(1)配制飼喂溶液：蔗糖溶液、蛋白酶抑制劑溶液和Bt蛋白溶液；

所述蔗糖溶液作為陰性對照；

所述蛋白酶抑制劑溶液作為陽性對照；

所述Bt蛋白溶液為含有Bt蛋白的蔗糖溶液；

(2)將剛孵化的龜紋瓢蟲1齡幼蟲單頭放入離心管中，并在離心管底部加入飼喂溶液，置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后，將幼蟲轉(zhuǎn)入新的離心管，并每日補(bǔ)充飼料；

當(dāng)幼蟲發(fā)育至2齡、3齡和4齡時，均更換離心管并重復(fù)上述操作；

每一種飼喂溶液作為一個試驗處理，每一個試驗處理的幼蟲數(shù)量不少于35頭；

(3)每天觀察并記錄幼蟲的發(fā)育、蛻皮及存活情況，直至其羽化，成蟲羽化后的12小時內(nèi)，將其分雌雄，并在天平上稱重；

(4)選擇幼蟲和蛹的發(fā)育歷期、幼蟲和蛹的死亡率和雌蟲和雄蟲的體重作為評價參數(shù)指標(biāo)，評價Bt蛋白對龜紋瓢蟲的安全性。