[發明專利]一種預處理方法及果膠的檢測方法

有效

• 申請號: 201410640726.1
• 申請日: 2014-11-13
• 公開（公告）號: CN104316382B
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發明（設計）人: 韓梅;郭本恒;董文琪;徐致遠;劉振民;楊博崴
• 申請（專利權）人: 光明乳業股份有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N21/31
• 代理公司: 上海弼興律師事務所31283
• 代理人: 朱水平,王衛彬

技術領域

本發明涉及一種預處理方法及果膠的檢測方法。

背景技術

果膠是一類高分子碳水化合物，其分子主鏈是由α-1,4-糖苷鍵連接起來的半乳糖醛酸鏈構成的。因此，通常用半乳糖醛酸的含量計算樣品中的果膠含量。

由于糖類物質大都不吸收紫外光，故在測定果膠中半乳糖醛酸含量時，必須將其轉化衍生后方可進行測定。目前國內常用的測定糖醛酸含量的方法為硫酸咔唑法或間羥基聯苯法。在實際工作中，往往發現測得的結果與實際情況不符，主要原因是乳飲料中的中性己糖和戊糖對實驗結果的干擾，影響糖醛酸含量測定的準確性。

間羥基聯苯法測定果膠含量步驟如下：首先糖醛酸與含四硼酸鈉的硫酸溶液在高溫作用下水解，水解產物進一步與間羥基聯苯反應，生成粉紅色衍生物，產生紫外吸收，且在一定濃度范圍內，該衍生物吸收值與糖醛酸含量呈線性關系，可通過比色法對糖醛酸含量進行計算。

與硫酸咔唑法相比較，間羥基聯苯法對糖醛酸顯色的專一性強，但是當中性糖含量較多時，中性糖會與硫酸反應碳化生產褐色物質，導致吸光度的增加，嚴重影響實驗結果。乳飲料中一般含有較高含量的葡萄糖、蔗糖、乳糖等中性糖，而起穩定劑作用的果膠的添加量極少，因此中性糖的存在嚴重干擾果膠含量的測定，如牛奶中乳糖的含量45g/L左右，調制乳中一般還會添加40g/L-80g/L的蔗糖，而起穩定劑作用的果膠的含量一般小于5g/L，當采用間羥基聯苯法時，中性糖的存在對產品中果膠的檢測影響很大。所以采取間羥基聯苯法測定乳飲料中果膠含量時，如何解決中性糖的干擾是十分重要的。

現有技術一般檢測半乳糖醛酸的方法為液相的方法，實驗繁瑣，而且不一定適用于乳飲料，只能夠檢測水溶液。如何檢測乳飲料的果膠的含量是亟待解決的問題。

發明內容

本發明克服了現有技術中當采用間羥基聯苯法測定果膠含量時，預處理過程后中性糖和乳蛋白含量相對較高，由于中性糖干擾導致準確性低、重現性差和果膠損失較多，以及現有技術中檢測半乳糖醛酸的方法為液相，實驗繁瑣只能檢測水溶液，不一定適用于乳飲料的缺陷，提供了一種預處理方法及果膠的檢測方法。本發明可以用于檢測乳飲料中的果膠含量，實驗的步驟簡單、準確度高、重現性好，且預處理過程在盡可能除去了中性糖和乳蛋白的同時，又減少了果膠的損失。

本發明通過以下技術方案解決上述技術問題。

本發明提供了一種預處理方法，其包括以下步驟：

(1)將待測果膠樣品在堿性溶液中進行蛋白質沉淀，分離得濾液；

(2)向將步驟(1)所得的濾液中加入乙醇的濃度至50％體積分數以上，進行沉淀處理，分離得沉淀；

(3)將步驟(2)所得的沉淀溶于水得溶液A，加入乙醇的濃度至50％體積分數以上，進行二次沉淀處理，分離得沉淀；

(4)將步驟(3)所得的沉淀溶于水，得溶液。

步驟(1)中，所述的待測果膠樣品一般是指含有果膠的液體待測樣品，較佳地為包含果膠的液態奶制品。

步驟(1)中，所述的堿性溶液為本領域內常規的能使蛋白質沉淀的堿性溶液，較佳地為碳酸鈉溶液，碳酸氫鈉溶液，氫氧化鉀溶液，碳酸鉀溶液，碳酸氫鉀溶液和氫氧化鈉溶液中的一種或幾種，更佳地為氫氧化鈉溶液。所述的堿性溶液的溶度較佳地為0.5-1mol/L。所述的堿性溶液與所述的待測果膠樣品的體積比較佳地為1:5-1:15，更佳地為1:10。

步驟(1)中，所述的分離為本領域內常規，較佳地為離心。所述的離心較佳地轉速為5000-10000r/min，時間為5-10分鐘。

步驟(2)中，所述的乙醇為本領域內常規的乙醇，所述的加入乙醇的濃度至50％體積分數以上是通過加入95％體積分數的乙醇溶液實現的，所述的95％體積分數的乙醇溶液與所述的濾液的體積比較佳地為1:1.8-1:4。

步驟(2)中，所述的分離為本領域內常規，較佳地為離心。所述的離心較佳地轉速為5000-10000r/min，時間為5-10分鐘。

步驟(3)中，所述的水為本領域內常規，較佳地為符合GB/T 6682要求的二級水。

步驟(3)中，所述的乙醇為本領域內常規的乙醇，所述的加入乙醇的濃度至50％體積分數以上是通過加入95％體積分數的乙醇溶液實現的；