[發(fā)明專利]一種溶血劑及其應用和白細胞分類計數方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410620796.0
• 申請日: 2014-11-05
• 公開（公告）號: CN104297134A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設計）人: 馮劍軍;朱漩;蔣玉林
• 申請（專利權）人: 深圳市開立科技有限公司
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 王仲凱

技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)學檢驗技術領域，具體涉及一種溶血劑及其應用和白細胞分類計數方法。

背景技術

白細胞亦稱白血球，血液細胞成分之一，為無色圓形細胞，比紅細胞略大，有細胞核。可分為嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞五種。在機體發(fā)生炎癥或疾病時，白細胞數往往發(fā)生變化，故白細胞分析是醫(yī)學實驗室血液檢驗中最常采用的檢測項目之一。白細胞計數和分類不僅對疾病的診斷、鑒別診斷、療效觀察和預后分析均有重要意義，而且對健康狀態(tài)的評估也有一定的價值。

白細胞中的嗜堿性粒細胞大小約為10～15um，呈圓形或橢圓形，細胞核與細胞質之比約為1：2～1：3，細胞核分葉狀，常被顆粒覆蓋，核染色質聚集，無核仁，細胞質含粗大、致密、深紫色或黑色顆粒，在健康人體血液中嗜堿性粒細胞大約占白細胞總數的0.5～1％，嗜堿性粒細胞增多見于慢性粒細胞白血病、何杰金氏病、癌轉移、鉛鉍中毒等。

采用瑞氏試劑對樣品染色并進行人工鏡檢是白細胞五分類計數的“金標準”，但是隨著人們對臨床檢測要求的不斷提高，這種耗時、繁瑣的標準方法越來越不適應如今的臨床檢測。隨著醫(yī)學血液學的發(fā)展,各種類型的血細胞分析儀配合專用試劑(如溶血劑等)的檢測方法在國內得到了廣泛的應用,這些全自動的儀器先通過專用試劑處理紅細胞(RBC)，然后采用流式技術或電阻抗的計數原理，通過獲取白細胞不同細胞器發(fā)射出的熒光信息和散射光信息將白細胞分成不同種類。

然而，由于不同類的白細胞的體積可能差別不大，電阻抗原理這種方法只是將白細胞簡單分類成淋巴細胞，單核細胞和粒細胞，并不能將嗜堿性粒細胞區(qū)分和計數。也有的儀器使用的是光散射原理，比如專利US3740143，使用光學方法可以將淋巴細胞、單核細胞，中性粒細胞，嗜酸性粒細胞區(qū)分和計數，但由于嗜堿性粒細胞數量較少，這種方法也不能很好的檢測到嗜堿性粒細胞。

現(xiàn)有技術中公開了多種用于白細胞分類的試劑，如CN2011100744709涉及一種用于白細胞五分類計數的溶血劑及用途。所述溶血劑由溶血劑A與溶血劑B組成。溶血劑A由聚氧乙烯型非離子表明活性劑、有機酸、季銨鹽陽離子表面活性劑助溶劑、穩(wěn)定劑和滲透壓調節(jié)劑組成；溶血劑B由堿性無機鹽和滲透壓調節(jié)劑組成。該溶血劑能夠將白細胞分為淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜中性粒細胞和嗜堿性粒細胞，獲得各類白細胞數量。

雖然上述專利記載的技術方案可以有效區(qū)分各類白細胞，但是對于僅需要區(qū)分嗜堿性粒細胞和其他白細胞來說，其所采用的溶血劑配方較為復雜繁瑣，組分較多，而且使用上也需要按照一定的操作步驟來，簡便性較差。

US5196346(Didier?Lefevre)公開了一種測量白細胞和嗜堿性粒細胞的溶血劑，該溶血劑使用非離子型表面活性劑Brij35和陰離子型表面活性劑，但這種溶血劑對使用溫度要求高，溶血速度慢，且原料來源較為繁瑣，在使用上仍然不夠簡便。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種用于白細胞分類計數的溶血劑，使得該溶血劑的溶血速度快、組分較少，使用方便，能夠正確區(qū)分嗜堿性粒細胞和其他白細胞。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

一種溶血劑，包含：

一種或兩種以上陽離子表面活性劑、一種或兩種以上小分子醇、一種或兩種以上緩沖液、一種或兩種以上可溶性無機鹽，余量為水。

本發(fā)明針對目前配方較為復雜的各種溶血劑，選擇適宜的組分組合使用，研制出一種新型的可用于準確區(qū)分嗜堿性粒細胞和其他白細胞的溶血劑，使用方便并且溶血速度較快，彌補了現(xiàn)有溶血劑的缺陷。

其中，作為優(yōu)選，所述溶血劑pH值為1.5-4.5，包含濃度為0.1g/L-100g/L的一種或兩種以上陽離子表面活性劑、濃度為0.01g/L-50g/L的一種或兩種以上小分子醇、濃度為0.001mol/L-1mol/L的一種或兩種以上緩沖液、濃度不大于30g/L的一種或兩種以上可溶性無機鹽。余量為水。

更優(yōu)選地，所述溶血劑pH值為2-3，包含濃度為1g/L-20g/L的一種或兩種以上陽離子表面活性劑、濃度為1g/L-20g/L的一種或兩種以上小分子醇、濃度為5mmol/L–200mmol/L的一種或兩種以上緩沖液、濃度不大于20g/L的一種或兩種以上可溶性無機鹽。