[發明專利]一種熒光抗酸染色液及用該染色液檢測抗酸桿菌的方法

在審

• 申請號: 201410580766.1
• 申請日: 2014-10-27
• 公開（公告）號: CN104388520A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 房濱;寧春華;聶暉;崔蘭蘭;韓瑩瑩;劉俊廷;曹立璇
• 申請（專利權）人: 濟南百博生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張俊濤

（一）??????技術領域

????本發明涉及病理檢測領域，特別涉及一種熒光抗酸染色液及用該染色液檢測抗酸桿菌的方法。

（二）??????背景技術

結核(Tuberculosis，簡稱TB)是常見并可致命的一種傳染病，由分枝桿菌又稱結核桿菌導致。結核通常感染并破壞肺以及淋巴系統，但其它器官如腦、中樞神經系統、循環系統、泌尿系統、骨骼、關節、甚至皮膚亦可受感染。據世界衛生組織統計資料顯示，全球目前有近三分之一的人感染結核桿菌，結核病患者達2000萬人，每年新增患者880萬人，死亡200萬人。因此，早期、快速、有效的病原學診斷對及時治療結核病、減少病死率和后遺癥極其重要。

目前，臨床上檢測結核病主要依靠抗酸染色法（Ziehl－Neelsen）來確診?？顾崛旧ㄗ鳛榻浀涞姆椒?，結果較為準確且長期用于診斷結核病，但由于鏡檢時間較長，由于操作原因可能導致顏色對比不明顯，陽性檢出率較低，無法完全滿足臨床需求。

（三）??????發明內容

????本發明為了彌補現有技術的缺陷，提供了一種方法簡單、陽性檢出率高的熒光抗酸染色液，同時提供了利用該染色液檢測抗酸桿菌的方法。

本發明是通過如下技術方案實現的：

一種熒光抗酸染色液，其特征是，

包括A液：每1000ml溶液中包含下列組分：

金胺O?0.5-1.3g，95%乙醇?50-130ml，苯酚50-130ml，余量為水；

其配置方法為：將金胺O加入到95%乙醇中，不斷攪拌充分溶解；將60-70℃加熱溶解的苯酚，溶于少量水中；兩者混勻后用水定容至1000ml，并攪拌1h；

B液：為由37%鹽酸20-100ml、95%乙醇900-980ml組成的混合溶液，其配置方法為：先加入37%鹽酸，再加入部分95%乙醇，攪拌均勻后用余量95%乙醇定容至1000ml后攪拌均勻；

C液：每1000ml溶液中，高錳酸鉀2-10g，余量為水，其配置方法為：先將高錳酸鉀溶入部分水，攪拌均勻后再用水定容至1000ml，并攪拌1h。

所述A液：每1000ml溶液中包含下列組分：金胺O?1.2g，95%乙醇?100ml，苯酚100ml，余量為水。

所述B液的組成成分為：37%鹽酸30ml、95%乙醇970ml。

每1000ml溶液中，高錳酸鉀7g，余量為水。

使用上述任一項所述的熒光抗酸染色液檢測抗酸桿菌的方法，其特征是，包括以下步驟?：

1）將結核菌標本均勻涂布于潔凈玻片上，自然干燥，經火焰固定之后，滴加A液3-4滴，室溫染色15min或加熱5min；

2）冷卻后，再用流動水自玻片一端輕緩沖洗去除染色液；

3）加B液數滴于載玻片，輕輕搖動載玻片，脫色2-3min或至無色，然后再用水緩慢沖洗；

4）水洗，沖去脫色液,如果標本表面還可以看到殘存紅色，再添加B液至完全脫掉紅色為止；

5）加C液1-2滴，復染2-4min；水洗，干燥后在暗室鏡檢。

本發明的有益效果是：

本發明的染色液染色簡單、時間短，無沉渣，熒光鏡下菌體呈現明亮橘黃色，背景黑暗，特征對比清晰，熒光染色后保存時間長，陽性率高、不易漏檢等優點。本發明對抗酸桿菌的鑒別診斷和治療具有重要意義。

（四）??????具體實施方式

熒光抗酸染色液的配置：

A液的配制之

實施例一：

將0.5克金胺O加入到130ml?95%乙醇中，不斷攪拌充分溶解；將60-70℃加熱溶解的苯酚50ml，溶于少量水中；兩者混勻后用水定容至1000ml，并攪拌1h；

實施例二：

將1.3克金胺O加入到50ml?95%乙醇中，不斷攪拌充分溶解；將60-70℃加熱溶解的苯酚130ml，溶于少量水中；兩者混勻后用水定容至1000ml，并攪拌1h；

實施例三：

將1.2克金胺O加入到100ml?95%乙醇中，不斷攪拌充分溶解；將60-70℃加熱溶解的苯酚100ml，溶于少量水中；兩者混勻后用水定容至1000ml，并攪拌1h；

B液的配置之

實施例一：

先在容量瓶中加入20ml37%鹽酸，再加入部分95%乙醇，攪拌均勻后用余量95%乙醇定容至1000ml后攪拌均勻；

實施例二：