[發(fā)明專利]一種基于目標觸發(fā)的可二次擴增的探針及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201410579896.3
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN105087555A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳昊;鄒霈;劉婭靈;王洪勇;吳軍;諸飛帆
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省原子醫(yī)學研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250
• 代理人: 趙敏

1.一種基于目標觸發(fā)的可二次擴增的探針，其特征在于，所述探針包括第一發(fā)夾、第二發(fā)夾以及第三發(fā)夾；所述第一發(fā)夾、第二發(fā)夾以及第三發(fā)夾均為單鏈線形分子自身回折后，折疊區(qū)域內(nèi)的互補堿基配對雜交而成，其局部區(qū)域形成雙鏈結(jié)構(gòu)的部分為莖干區(qū)，未形成雙鏈結(jié)構(gòu)并回折的部分為環(huán)狀區(qū)；

所述第一發(fā)夾包括：識別目標DNA的識別區(qū)(Ⅰ)以及與所述識別區(qū)(Ⅰ)部分雜交形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的第一莖干區(qū)(Ⅱ)；

所述第二發(fā)夾包括：與所述第一發(fā)夾的識別區(qū)(Ⅰ)部分雜交的堿基互補區(qū)(Ⅲ)；

所述第三發(fā)夾包括：可與所述第一發(fā)夾的第一莖干區(qū)(Ⅱ)部分雜交的第二莖干區(qū)(Ⅱ’)以及G-四鏈體區(qū)(Ⅳ)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于目標觸發(fā)的可二次擴增的探針，其特征在于，所述G-四鏈體區(qū)(Ⅳ)具有如SEQIDNo.1所示的序列結(jié)構(gòu)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于目標觸發(fā)的可二次擴增的探針，其特征在于，所述第一發(fā)夾、第二發(fā)夾、第三發(fā)夾中，所述環(huán)狀區(qū)的堿基個數(shù)與所述莖干區(qū)的堿基個數(shù)的比值大于2。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于目標觸發(fā)的可二次擴增的探針，其特征在于，所述第一發(fā)夾、第二發(fā)夾、第三發(fā)夾中，所述莖干區(qū)的序列長度為5-16個堿基，且在所述堿基中，胞嘧啶和鳥嘌呤的個數(shù)分別占總堿基數(shù)的60％以下。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的基于目標觸發(fā)的可二次擴增的探針，其特征在于，所述第一發(fā)夾、第二發(fā)夾、第三發(fā)夾的5’端的第一個堿基為胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶中的一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的基于目標觸發(fā)的可二次擴增的探針，其特征在于，所述第一發(fā)夾具有如SEQIDNo.2所示的結(jié)構(gòu)；所述第二發(fā)夾具有如SEQIDNo.3所示的結(jié)構(gòu)；所述第三發(fā)夾具有如SEQIDNo.4所示的結(jié)構(gòu)。

7.一種檢測DNA分子的方法，其特征在于，利用權(quán)利要求1-6中任一所述的基于目標觸發(fā)的可二次擴增的探針進行檢測。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：將權(quán)利要求1-6中任一所述的基于目標觸發(fā)的可二次擴增的探針置于待測溶液中，并加入核酸外切酶Ⅲ，5-35℃下培育4-10h，然后向其中加入氯化血紅素培育，并加入2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽以及過氧化氫混勻反應(yīng)，觀察或檢測混合液的發(fā)光或變色情況。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，還包括在在加入所述待測溶液前，將所述探針先緩慢加熱至95℃，保持5-10分鐘，然后在至少2小時以上的時間內(nèi)，將其緩慢冷卻至室溫的步驟。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于，在加入氯化血紅素的同時還包括加入氫離子緩沖液的步驟。

11.權(quán)利要求1-6中任一所述的基于目標觸發(fā)的可二次擴增的探針在檢測DNA分子領(lǐng)域的用途。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于，所述DNA分子具有如SEQIDNo.5、SEQIDNo.6、SEQIDNo.7、SEQIDNo.8、SEQIDNo.9、SEQIDNo.10、SEQIDNo.11所示的結(jié)構(gòu)。