[發明專利]一種小麥轉化雙T超毒載體及應用

有效

• 申請號: 201410579104.2
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN104388462B
• 公開（公告）日: 2017-09-12
• 發明（設計）人: 陳建民;陳云;高勇;劉霜;劉慧君
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明屬于作物遺傳育種領域，具體涉及一種小麥轉化雙T超毒載體。

背景技術

1、小麥的育種目標

小麥(Triticum aestivum)是世界上總產量僅次于玉米的第二大糧食作物，是人類的主食之一。隨著人口的急劇增長、耕地面積的減少，提高小麥產量已成為全世界面臨的一個嚴峻問題。普通小麥(AABBDD,2n＝42)是異源六倍體植物，屬于禾本科小麥屬普通小麥種(Triticum aestivum L.)，目前小麥育種的主要目標仍然是高產、抗逆和優質，分子標記輔助選擇、外源優良基因的應用、多基因聚合是現代小麥育種研究熱點(何中虎等,2006)。常規育種技術周期長，種植資源發掘利用不夠，育種方法、手段在很大程度上依賴經驗模式，而通過基因工程手段，向栽培植物導入抗逆性的外源基因，已發展成為改良植物抗脅迫的新途徑。20世紀60至70年代，人們就效仿細菌轉化方法開展了植物轉基因的嘗試。1983年，Zambryski首次用根癌農桿菌介導法獲得第一例轉基因植株，開創了植物轉基因的先河，標志著植物轉基因時代的到來(Zambryski et al.,1983)。1985年，Horsch等創立了農桿菌介導的“葉盤法”轉基因系統，它大大簡化了以往利用原生質體為受體的轉基因體系，具有里程碑的意義(Horsch et al.,1985)。1987年Sanford等發明了基因槍，該實驗室Klein首次將其用于植物轉基因研究(Klein et al.,1987)。它克服了當時農桿菌介導法的受基因型和受體種類的限制，開創了植物轉基因方法的新領域。

2、小麥轉化方法

目前，植物轉基因技術已成為植物分子生物學研究的強有力的手段，更是功能基因組研究不可或缺的實驗工具。小麥為異源六倍體植物，基因組大，基因調控困難，由小麥外植體所誘導的愈傷組織普遍存在成愈率低、愈傷胚性差、分化率低、轉化細胞再生困難、基因型依賴性大等問題，是舉世公認的最難轉化的栽培作物。目前，小麥遺傳轉化體系中，所用的方法包括農桿菌介導法、基因槍轉化法、花粉管通道法、顯微注射法、激光微束穿刺法、PEG法和電擊法等。但隨著基因槍法和農桿菌法的不斷改善，它們已逐漸成為小麥轉化的主要方法。

3、農桿菌轉化法

農桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位，并誘導產生冠癭瘤或發狀根。在植物基因工程的發展中，研究和應用比較清楚和成功的是根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導的遺傳轉化。