[發明專利]復方氨基酸注射液18AA?II含量測定方法

有效

• 申請號: 201410579008.8
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN105588900B
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 孔文靜;陸宇;劉春霞;鄒姍姍
• 申請（專利權）人: 華仁藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 青島聯信知識產權代理事務所(普通合伙)37227
• 代理人: 高洋

技術領域

本發明涉及藥品制備領域，特別涉及一種復方氨基酸注射液18AA-II含量測定方法。

背景技術

氨基酸是蛋白質的基本結構單位和生物代謝過程中的重要物質，氨基酸分析技術對蛋白質化學、生物化學和整個生命科學研究以及產品開發、質量控制盒生產管理等具有重要意義，廣泛地應用于食品加工、醫藥衛生行業的醫藥、食品、保健品等的分析。其分析測定方法，按照檢測方法可分為化學分析法、電化學分析法、分光光度法等；按照衍生反應的先后，可分為柱前衍生和柱后衍生。

以上分析方法中，化學分析法、電化學分析法以及分光光度法的專屬性差，不能實現多種氨基酸同時分離測定；柱前衍生法，雖然可以使用自動進樣器與色譜聯用實現多種氨基酸的分離測定，但是衍生技術較為復雜，周期較長，衍生條件不易控制，重復性較差，難以推廣。

氨基酸的分離分析方法很多，近年一般認為離子交換色譜法是比較準確的定量方法，氨基酸分析儀和HPLC法使用較為普遍。但是HPLC法衍生技術較為復雜，周期較長，衍生條件不易控制，重復性較差，難以推廣。相對于HPLC法，氨基酸分析儀靈敏快速提供數據準確可靠：分辨率高操作簡單分析周期短；保留時間，峰面積，重現性好檢出限可達3pmol，不存在液級衍生物的問題，峰型顯高斯分布，體系穩定快。

常規的氨基酸含量測定，通常采用的都是氨基酸分析儀儀器廠家本身推薦的分離條件，包括緩沖液pH值、緩沖液變換時間以及柱溫等等。

但是，在使用氨基酸分析儀對復方氨基酸注射液（18AA-II）進行含量測定時，由于胱氨酸含量較小，并且胱氨酸出峰時間正好在流動相轉化時間附近，使用儀器本身的分離條件進行試驗，導致胱氨酸與纈氨酸分析效果不佳，達不到試驗對組分分離度的要求，同時胱氨酸含量波動較大，致使含量測定結果準確度不佳，重現性差。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種復方氨基酸注射液18AA-II含量測定方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種復方氨基酸注射液18AA-II含量測定方法，采用離子交換樹脂柱，柱溫57℃，流量為0.4ml/min，檢測波長是570nm和440nm，流動相是由緩沖液B1、B2、B3、B4、B5組成，洗脫時間為60分鐘，0-2.5分鐘采用100%的B1進行洗脫，2.6-5分鐘采用100%的B2進行洗脫，5.1-13.6分鐘采用100%的B3進行洗脫，13.7-27.8分鐘采用100%的B4進行洗脫，27.9-33.8分鐘采用100%的B5進行洗脫，33.9-34.8分鐘采用100%的B2進行洗脫，34.9-53.8分鐘采用100%的B1進行洗脫；

所述緩沖液B1組成為6.19g檸檬酸鈉·2H₂O、1M NaOH 6-7 mL、5.66g氯化鈉、19.80g檸檬酸·H₂O、135.0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液；

所述緩沖液B2組成為7.74g檸檬酸鈉·2H₂O、1M NaOH 20-22 mL 、7.07g氯化鈉、22.00g檸檬酸·H₂O、25.0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液；

所述緩沖液B3組成為13.31g檸檬酸鈉·2H₂O、3.74g氯化鈉、12.80g檸檬酸·H₂O、9.00ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液；

所述緩沖液B4組成為26.67g檸檬酸鈉·2H₂O、54.35g氯化鈉、6.10g檸檬酸·H₂O，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液；

所述緩沖液B5組成為8.00g NaOH、100.0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液。

本發明的有益效果：

本發明在緩沖液從B2向B3轉換的時間推后0.5min，在緩沖液從B3向B4轉換的時間推后0.8min，分離柱溫度達到57度時，各組分間的分離效果更好，使胱氨酸與纈氨酸二者分離度滿足含量測定的要求，同時使得胱氨酸受流動相轉換的干擾降低，使其在含量較低的情況下也能準確定量，最終實現了氨基酸分析儀對復方氨基酸注射液（18AA-II）16種氨基酸含量的準確測定。

附圖說明

附圖1為氨基酸分析儀推薦的分離條件的分離圖譜；

附圖2為本發明的分離條件的分離圖譜。

具體實施方式