[發明專利]miR?200b在制備Rac?1蛋白表達抑制劑中的新用途

有效

• 申請號: 201410570992.1
• 申請日: 2014-10-22
• 公開（公告）號: CN104293791B
• 公開（公告）日: 2018-01-12
• 發明（設計）人: 崔紅;楊麗君;馬東青;楊愛君;朱琳涵
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京友誼醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00;A61P9/10
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司11279
• 代理人: 叢芳

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及一種Rac-1蛋白抑制劑及其應用，更具體的涉及一種miRNA及其應用。

背景技術

microRNAs(miRNAs)是一種內源性非編碼RNA，主要參與基因轉錄后水平的調控。miRNAs通過與信使RNA(mRNA)3′非翻譯區(UTR)結合導致靶mRNA降解或翻譯抑制。與其他小分子RNA不同，miRNA不需要嚴格的堿基配對，因此，可以廣泛調節基因網絡。雖然miRNA的生物學功能剛剛被人們熟知，它在疾病發病和進展中所顯現的治療潛力已引起人們極大的興趣。越來越多的證據表明，以miRNA為基礎的基因治療，不管是增強或抑制miRNA的表達和活性，都有很大的應用前景。

Rac-1全稱為Ras相關的C3肉毒毒素底物1(ras-related C3 botulinum toxin substrate 1)，屬于Rho-GTP酶家族。Rac-l廣泛表達，以兩種構象狀態存在，一種是失活的GDP結合形式，另一種是活化的GTP結合形式。在細胞外信號的作用下，Racl通過鳥苷酸交換因子(GEFs)轉變成其活化形式。而GTP酶激活蛋白(GAPs)則使Rac-l失去活性。Rac-l通過能協調多種信號傳導級聯反應的結構域與特異的效應物相互作用影響了多種生理作用。Rac-1蛋白參與了許多細胞的多種生命活動，包括肌動蛋白細胞骨架的重構、細胞黏附、細胞運動、上皮細胞的極性、胞漿移動、基因轉錄和表達以及細胞周期和凋亡的調控等。其中較重要的是，Rac-1可通過參與Wnt/PCP通路，調節JNK的活性，從而發揮其重塑細胞骨架等作用。Rac-1也可通過調控HIF-1α的表達和活性參與缺氧信號傳導通路。Racl還可通過JNK2激酶引起β-catenin在Serl91和Ser605的磷酸化，進而促進了β-eatenin的核轉位，從而促進了經典的wnt信號傳導通路。Rac-1蛋白參與了腫瘤發生、發展的各個階段，包括的腫瘤的生長和生殖、侵襲和轉移、細胞周期進展、細胞凋亡以及腫瘤新生血管的生成等。Rac-1分子功能的多樣性與其上下游效應分子的多樣性有關。

本發明旨在研究miR-200b在缺氧缺血性腦損傷的組織中與Rac-1的關系。發明首先建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型，進行相應組的miRNA激動劑或拮抗劑轉染，分別過表達和低表達miR-200b，于不同時間點取大鼠腦組織進行Western blot試驗，檢測Rac-1蛋白的變化趨勢，從而了解miR-200b對Rac-1的作用。結果顯示轉染miR-200b后，Rac-1蛋白表達降低，拮抗miR-200b后，Rac-1蛋白表達進一步升高，說明miR-200b可能通過介導Wnt/PCP通路參與缺氧缺血性腦損傷的修復作用。本發明提供了miR-200b的新應用，可以有效的調節Rac-1蛋白的表達，這具有重要的臨床應用價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種抑制Rac-1蛋白表達的方法，包括：

1)制備miRNA-200b模擬物；

2)將上步制備的miRNA轉染到表達Rac-1蛋白的細胞或組織中。

所述miRNA-200b成熟序列為mmu-mir-200b-3p(miRBase登錄號為MIMAT0000233)。

進一步，所述miRNA選自pri-miRNA、pre-miRNA、成熟miRNA、dsmiRNA及其片段或變體中的一種或幾種。

本發明中miRNA-200b、miR-200b、microRNA-200b屬于同一物質的不同表達形式，所代表的意思相同。

術語―miRNA‖(微小RNA)是指任何類型的干擾RNA，包括但不限于，內源微小RNA和人工微小RNA。內源miRNA是在基因組中天然存在的小RNAs，其能夠調節mRNA的生產利用。術語―人工的‖或―合成的‖miRNA包括除內源miRNA之外的任何類型的RNA序列，其能夠調節mRNA的生產利用。

―微小RNA側翼序列‖是指包括miRNA加工元件的核苷酸序列。miRNA加工元件是促成從前體miRNA產生成熟miRNA的最小限度核酸序列。稱為pri-miRNAs的前體miRNA在細胞核中被加工成大約15-70個核苷酸的pre-miRNAs，其折疊成不完全的莖-環結構。