[發明專利]一種酶活提高的天冬酰胺酶突變體

有效

• 申請號: 201410568323.0
• 申請日: 2014-10-22
• 公開（公告）號: CN104371993B
• 公開（公告）日: 2016-10-19
• 發明（設計）人: 劉松;馮岳;陳堅;堵國成;陳雙全;王廣圣;陳璇
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/82
• 分類號: C12N9/82;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 張勇

1.一種酶活力提高的天冬酰胺酶突變體，是將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的天冬酰胺酶第133位的天冬酰胺分別突變為酪氨酸或色氨酸；或將143位的纈氨酸突變為異亮氨酸；或在將143位的纈氨酸突變為異亮氨酸的同時，將第133位的天冬酰胺分別突變為色氨酸或酪氨酸。

2.根據權利要求1所述的天冬酰胺酶突變體，其特征在于，天冬酰胺酶突變體的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.2-6所示。

3.一種獲得權利要求1所述突變體的方法，是通過定點突變技術將天冬酰胺酶蛋白質分子內部第133位的天冬酰胺分別突變為酪氨酸、色氨酸；或將143位的纈氨酸突變為異亮氨酸；或在將143位的纈氨酸突變為異亮氨酸的同時，將第133位的天冬酰胺分別突變為酪氨酸或色氨酸。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，將含有編碼天冬酰胺酶的基因與載體pET22b(+)連接，轉化大腸桿菌E.coli?rosetta；挑選轉化子接種到LB液體培養基中，37℃培養12h，轉接到TB培養基中，接種量為3％；菌體長到OD₆₀₀為1.5時，加入IPTG誘導，并將培養溫度降到30℃，培養24h，收集發酵上清，純化獲得天冬酰胺酶突變體。

5.一種表達權利要求1所述天冬酰胺酶突變體的大腸桿菌，是將含有編碼天冬酰胺酶的基因與表達載體連接后轉化大腸桿菌。

6.根據權利要求5所述的大腸桿菌，其特征在于，將含有編碼天冬酰胺酶的基因與載體pET22b(+)連接，轉化大腸桿菌E.coli?rosetta。

7.權利要求1所述天冬酰胺酶突變體的應用。

8.權利要求5所述大腸桿菌的應用。

9.一種提高天冬酰胺酶活力的方法，其特征在于，是將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的天冬酰胺酶蛋白質分子內部第133位的天冬酰胺分別突變為酪氨酸、色氨酸；或將143位的纈氨酸突變為異亮氨酸；或在將143位的纈氨酸突變為異亮氨酸的同時，將第133位的天冬酰胺分別突變為酪氨酸或色氨酸。