[發明專利]一種固定化蛋白的方法

有效

• 申請號: 201410557224.2
• 申請日: 2014-10-20
• 公開（公告）號: CN105503879B
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 潘崢嬰;郭天林;周怡青
• 申請（專利權）人: 北京大學深圳研究生院
• 主分類號: C07D487/04
• 分類號: C07D487/04;C07D519/00;C07K17/02;C07K17/04
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 周齊宏;楊思捷

本發明涉及一種用于固定蛋白的方法。本發明還涉及一種用于固定蛋白的化合物。所述化合物具有氟磺酰基，能夠特異性地且共價地在酪氨酸殘基處來標記蛋白。

技術領域

本發明涉及一種用于固定蛋白的化合物以及一種用于固定蛋白的方法。

背景技術

將蛋白固定到如微陣列、芯片和珠等固體載體上是一種用于闡明蛋白-蛋白或蛋白-配體相互作用以及用于以高處理量的方式探測新蛋白功能的強大方法。不同于DNA微陣列的情況，由于在實現將蛋白選擇性地且均勻取向地分布到固體表面中的固有困難，實施用于蛋白固定的通用方法存在著挑戰。

常規固定方法主要依賴三種機理：物理連接、共價鍵合和生物親和性固定。然而非選擇性的物理連接或共價鍵合可能阻塞活性部位或甚至使蛋白變性。通過重組融合標簽和所偶聯蛋白的共表達進行固定可以相應保證蛋白的確切取向并且提供了微調生物結合物拓撲結構的靈活性。例如，將sjGST標簽固定到GSH-結合的聚合物珠或將His-標簽固定到Ni-NTA芯片或將生物素-標簽結合到鏈霉親和素涂布的固體載體上已經被廣泛地選作非共價蛋白固定方法用于保持所標簽蛋白的活性。

因此開發一種有效且穩定的固定蛋白的策略，能夠最大限度地保持活性，是有著顯著意義和應用價值。位置選擇性共價固定蛋白最近引起很多關注，因為它能夠穩定地、均勻地且高密度地固定各種蛋白。其方法是將所關注的蛋白與標簽蛋白共表達，再利用后者與其被固定的底物分子共價地且選擇性地反應。比如，Kindermann等報道了一種通過不可逆地將O6-芐基鳥嘌呤衍生物的烷基連接到hAGT半胱氨酸殘基之一來固定hAGT-標簽的共價方法。

GST-標簽蛋白具有高底物親合性，然而，已知的GST標簽固定方法仍然基于可逆的GSH-GST結合，限制了它們的應用。

Viswanathan等報道了通過銅(I)-催化的Huisgen[3+2]環加成反應(“click”反應)將在C-末端半胱氨酸殘基上，用炔改性的GST蛋白共價固定到玻璃表面上的策略。盡管實現了共價和定向結合，但是銅催化劑可引起某些不穩定的蛋白的變性或沉淀，因此有可能在固定后降低了蛋白活性。另外，相比于傳統的GSH-GST方法，將炔基團引入GST蛋白是耗時的且高成本的。

發明內容

本發明的目的在于提供一類小分子物質，其能夠通過位置選擇性共價鍵合的方式共價固定蛋白，特別是sjGST-標簽化的蛋白。

本發明的目的還在于提供一類能夠以相對簡單的方法合成的具有氟磺酰基的小分子，當用它們處理sjGST-標簽化的蛋白時能夠共價地、選擇性地、不可逆地標記sjGST。

具體來說，本發明提供了下述技術方案：

技術方案1.式I的化合物：

其中，

R₁是苯基的任選取代基；

R₂是Ar的任選取代基；

m是0、1、2、3、4；

n是0、1、2、3、4；

連接基團是任選被取代的，并且是由下述A組中的0-15個和下述B組中的一個組成的三價基團，

A組：─O─、─NH─、─S─、─SO─、─SO₂─、─CO─、─C(═NH)─、─C(═S)─、─C(═SO)─、─C(═SO₂)─、─C_1-10亞烷基─、─C_3-10亞環烷基─、與─(3-10)元亞雜環烷基─，

B組：─N═、─C_1-10次烷基═、─C_3-10次環烷基═、與─(3-10)元次雜環烷基═；