[發明專利]犬新孢子蟲的分離方法和體外培養方法在審
| 申請號： | 201410550101.6 | 申請日： | 2014-10-15 |
| 公開（公告）號： | CN104312922A | 公開（公告）日： | 2015-01-28 |
| 發明（設計）人： | 賈立軍;張守發;魯承 | 申請（專利權）人： | 延邊大學 |
| 主分類號： | C12N1/10 | 分類號： | C12N1/10;C12R1/90 |
| 代理公司： | 北京紐盟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11456 | 代理人： | 許玉順 |
| 地址： | 133002 吉林省延*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 孢子 分離 方法 體外 培養 | ||
1.一種犬新孢子蟲的分離方法，其特征在于，包括以下步驟：
取一定體積濃度為10kU/ml的青霉素和10mg/ml的鏈霉素的雙抗，應用一次性注射器無菌采集犬新孢子蟲感染的動物腦組織，該犬新孢子蟲感染的動物腦組織體積為該雙抗體積的兩倍以上，將該雙抗加入到采集的該犬新孢子蟲感染的動物腦組織；
采用不同規格的一次性注射器按照針頭直徑縮小的順序反復吸吹。
2.根據權利要求1所述的犬新孢子蟲的分離方法，其特征在于，所述吸吹步驟中，反復吸吹至少10次以上。
3.根據權利要求1所述的犬新孢子蟲的分離方法，其特征在于，所述一次性注射器，針頭直徑的大小不小于27G。
4.根據權利要求1所述的犬新孢子蟲的分離方法，其特征在于，所述一次性注射器，選自12G針頭、20G針頭、27G針頭中任意一種以上的針頭。
5.根據權利要求1所述的犬新孢子蟲的分離方法，其特征在于，還包括：將經過處理的所述犬新孢子蟲感染動物腦組織接種到對數生長期的Vero細胞中培養。
6.根據權利要求5所述的犬新孢子蟲的分離方法，其特征在于，所述培養采用DMEM完全培養液。
7.根據權利要求6所述的犬新孢子蟲的分離方法，其特征在于，所述培養液含有1％雙抗和8％犢牛血清。
8.根據權利要求6或7中所述的犬新孢子蟲的分離方法，其特征在于，所述培養液每隔24小時更換一次。
9.一種犬新孢子蟲的體外培養方法，其特征在于，包括以下步驟：
采用含8％犢牛血清的DMEM培養液培養原代人胚腎細胞-293細胞；
當原代人胚腎細胞-293細胞長成單層細胞后，向每瓶原代人胚腎細胞-293細胞中接種103個根據權利要求1-8中任意一項所述的分離方法得到的犬新孢子蟲速殖子，每隔12小時更換培養液；以及
采用倒置顯微鏡觀察犬新孢子蟲速殖子增殖情況。
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