[發明專利]同步定量聯檢畸胎疾病多指標的量子點標記試條及其方法

在審

• 申請號: 201410545627.5
• 申請日: 2014-10-16
• 公開（公告）號: CN104280546A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發明（設計）人: 王春英;馬義才;侯飛
• 申請（專利權）人: 成都領御生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于體外診斷領域，具體涉及一種同步定量聯檢畸胎疾病多指標的量子點標記試條及其方法。

背景技術

巨細胞病毒(HCMV)、單純皰疹病毒(HSV)、風疹病毒(RV)和弓形蟲(TOX)是畸胎疾病的最可能病原體。孕婦如果患有上述病原物所致疾病中的一種，有可能導致流產、死胎、胎兒畸形等，或出現嬰兒智力低下、視聽障礙等遠期后遺癥。其中，人巨細胞病毒為“禍首”，它侵入人體后可無任何臨床表現，目前國內外對此尚無安全有效防治措施。因此，對上述病原物的檢查已成為孕婦身體檢查的必檢項目。

目前，對上述病原物的診斷大多采用酶聯免疫吸附法(ELISA)。該方法需要離心機先分離血清，還需要孵育箱、酶標儀等醫療設備，操作過程復雜，每次只能檢測一種指標，不能隨時隨地檢測，檢測過程至少需要40-60分鐘，且價格昂貴。

樣品多種組分同步檢測具有非常重要意義。傳統上測定混合體系中樣品多種組分含量，多采用平行單組分分析法，即每個分析流程只測定其中一種組分含量，多次平行執行該流程，最后得到所有所需組分含量。分析所需時間長，消耗試劑多，分析通量低，勞動量大。量子點（quantum?dot,?QD）熒光發光效率高，激發譜線范圍寬，能“一元激發，多元發射”，發射譜線范圍窄且對稱，光漂白速度慢，熒光壽命長，粒徑與生物分子相近，表面修飾后能多功能化，不同粒徑和種類的量子點混合物產生的特征波長熒光光譜不交疊，非常適用于樣品多組分分析。本發明公開一種同步定量聯檢畸胎疾病多指標的QD標記試條及其方法，以解決胎兒致畸疾病4指標（HCMV-Ab、HSV-Ab、RV-Ab、TOX-Ab）同步快速定量問題。

發明內容

本發明的第一個目的是公開一種同步定量聯檢畸胎疾病多指標的量子點標記試條。本發明的第二個目的是公開所述試條的制備方法、標準曲線制作方法、以及用所述試條同步定量畸胎疾病多指標的方法。

本發明上述目的是通過如下技術方案實現的：

所述的同步定量畸胎疾病多指標的量子點標記試條，包括順次搭接固定在底襯8上的樣品墊1、紅細胞濾膜2、標記墊3、分析膜7、吸水墊6。

所述標記墊3為玻璃纖維膜。所述分析膜7為硝酸纖維素膜、尼龍膜、或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜，其上具有檢測帶（即T帶）4和質控帶（即C帶）5。所述底襯8為聚脂或塑料板。

所述標記墊3包被有不同波長量子點對應標記的HCMV-Ag、HSV-Ag、RV-Ag、TOX-Ag、鼠抗體的混合物。所述分析膜7的T帶4包被有HCMV-Ag、HSV-Ag、RV-Ag、TOX-Ag的混合物。所述分析膜7的C帶5包被有二抗質控物羊抗鼠抗體。

本發明所述試條的標記墊3的量子點包括ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag₂S、CdS/PbS、CdS/Cd(0H)₂、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS:Mn、ZnS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb中的任意一種或任意幾種納米粒子的組合，以及由上述任意一種量子點為核、二氧化硅為殼的核-殼型納米復合粒子。

本發明所述同步定量聯檢畸胎疾病多指標的量子點標記試條的制備方法包括下述步驟：?

A.?量子點偶聯抗原/抗體：

a)?取不同波長量子點分別用磷酸緩沖液（PBS）調pH=6-9，加入EDC（l-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺鹽酸鹽）和NHS（N-羥基硫代琥珀酸亞胺）室溫活化10-60min。

b)?分別對應加入HCMV-Ag、HSV-Ag、RV-Ag、TOX-Ag、鼠抗體旋渦振蕩反應0.5-3h。

c)?分別對應加入BSA封閉反應0.5-2h。

d)?離心純化產物。

e)?取沉淀用PBS緩沖液重懸分散，4℃保存。