[發明專利]抑制S100A8基因表達的siRNA及其應用

在審

• 申請號: 201410541314.2
• 申請日: 2014-10-14
• 公開（公告）號: CN104293789A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 黃元姣;閆琳琳
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 吳彥峰

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體是涉及抑制S100A8基因表達的siRNA及其在抑制鼻咽癌細胞CNE1遷移功能中的應用。

背景技術

鼻咽癌(Nasopharyngeal?carcinoma?NPC)是一種來源于鼻粘膜上皮細胞的惡性腫瘤，95％以上屬于未分化癌類型，惡性程度高、生長快，容易出現淋巴結或血道轉移，因此大多數的鼻咽癌患者都死于腫瘤的轉移而并非原發灶。近年來隨著分子生物學及其技術的飛速發展，鼻咽癌的發生發展及其生物學行為已取得較大進展。多項研究表明，S100A8和S100A9參與腫瘤的發生發展，已有研究利用iTRAQ蛋白定量標記結合MALDI-TOF-MS質譜技術篩查鼻咽癌相關生物標志物時發現，鼻咽癌患者血漿中S100A8蛋白質和S100A9蛋白質的表達水平明顯高于健康人群。

S100A8蛋白(CalgranulinA蛋白、MRP8蛋白)與S100A9蛋白(CalgranulinB蛋白、MRP14蛋白)均屬于低分子量(分別為11kDa和14kDa)、氨基末端EF-1和羧基末端EF-2手型結構、鈣結合蛋白S100蛋白家族成員，兩者常以鈣離子依賴性方式形成異源二聚體S100A8/A9蛋白復合物。近年來研究發現，兩者在多種原發和浸潤性腫瘤，包括胃癌、結腸癌、胰腺癌、膀胱癌、卵巢癌、甲狀腺癌、乳腺癌、皮膚癌、鼻咽癌中表達上調。

癌癥的殺傷力主要是因為癌細胞侵入周圍組織并能進入血液或淋巴系統而進行遠端轉移。Saha等報道，用0.2-1μg/ml?S100A8/A9處理B6F10黑色素細胞，可引起與腫瘤細胞侵襲和遷移有關的基質金屬蛋白酶MMP的表達，促進細胞的遷移。而關于內源性S100A8/A9的研究，Yong等報道，腫瘤細胞自身表達的S100A8/A9也具有引起腫瘤細胞侵襲和遷移作用。

近年RNA干擾技術迅速發展，不僅廣泛用于腫瘤基因治療，而且也是研究基因功能的有用工具。因此通過研究設計S100A8?siRNA、S100A9?siRNA降低鼻咽癌細胞CNE1內S100A8/A9的表達，從而抑制鼻咽癌細胞的遷移，具有重要的臨床意義，但目前還沒有關于抑制S100A8、S100A9基因表達的siRNA的相關報道。

發明內容

本發明的發明目的在于提供抑制S100A8基因表達的siRNA，并進一步提供該siRNA在臨床上的應用。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

提供抑制S100A8基因表達的siRNA，其序列為：

正義鏈:5'-CCAGGAGUUCCUCAUUCUG-3'(SEQ?ID?NO.3)

反義鏈:5'-CAGAAUGAGGAACUCCUGG-3'(SEQ?ID?NO.4)

優選地，上述S100A8siRNA序列的3'端垂懸兩個dTdT，該垂懸不與mRNA序列互補，使正義鏈3'端更容易解鏈，從而增加其沉默效率。

上述S100A8siRNA序列可用于制備治療鼻咽癌的藥物。

本發明具有如下的優點：

(1)本發明提供的抑制S100A8基因表達的siRNA，能有效沉默S100A8基因，下調S100A8基因的表達。

(2)通過下調S100A8基因的表達，研究其對鼻咽癌細胞CNE1中MMP7基因表達和細胞遷移功能的影響，發現S100A8?siRNA對MMP7基因的表達有較好的抑制作用，可使鼻咽癌細胞遷移功能減弱，因此可以將其應用在治療鼻咽癌藥物的研究中。

附圖說明

本發明將通過例子并參照附圖的方式說明，其中：

圖1為體積比Lipofectamine?2000：siRNA＝1:3的siRNA轉染效率圖。

圖2為熒光定量PCR檢測陽性對照組(GAPDH)、陰性對照組(N.C.)中GAPDH基因的表達水平圖。

圖3為熒光定量PCR檢測S100A8?siRNA1組、S100A8?siRNA2組、S100A8?siRNA3組、陰性對照組(N.C.)中S100A8基因的表達水平圖。

圖4為熒光定量PCR檢測S100A8?siRNA2組、空白對照組、陰性對照組(N.C.)、脂質體對照組中S100A8基因的表達水平圖。

圖5為熒光定量PCR檢測S100A8?siRNA2組、空白對照組、陰性對照組(N.C.)、脂質體對照組中MMP7基因的表達水平圖。