[發明專利]鄰苯二甲酸在氨基酸分析中的應用

有效

• 申請號: 201410527881.2
• 申請日: 2014-10-09
• 公開（公告）號: CN104215721A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 郭寅龍;祁婉舒;張立;張菁;吳夢茜;范若靜
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海有機化學研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 上海海頌知識產權代理事務所(普通合伙) 31258
• 代理人: 何葆芳

技術領域

本發明涉及鄰苯二甲酸在氨基酸分析中的應用，具體說，是涉及鄰苯二甲酸作為流動相添加劑在氨基酸液相色譜－質譜聯用分析中的應用，屬于氨基酸分析技術領域。

背景技術

氨基酸不僅是生物體內蛋白質的基本組成單元，也是體內合成神經遞質、卟啉、多胺等含氮化合物的重要前體。近期的研究表明，氨基酸還在體內起著重要的調控作用，如基因表達過程、蛋白質的磷酸化、荷爾蒙的合成與分泌等。氨基酸在體內的存在形式主要有兩種，一種是以游離態存在于生理體液中，如血漿、尿液等之中，另一種是以結合態存在于多肽和蛋白質中。氨基酸作為生物體內代謝循環的重要組成部分，對其定性定量分析在蛋白質化學、生物化學、臨床醫學等領域的研究中都起著非常重要的作用。

目前氨基酸的分離、分析方法正在不斷地拓展和完善中，這些方法包括液相色譜與光學檢測器聯用技術(LC?methods?coupled?with?optical?detection)、液相色譜－質譜聯用技術(簡稱：LC-MS)、毛細管電泳－質譜聯用技術(簡稱：CE-MS)、氣相色譜－質譜聯用技術(簡稱：GC-MS)、核磁方法(簡稱：NMR)等(參見H.Kaspar，K.Dettmer，W.Gronwald，P.J.Oefne，Anal.Bioanal.Chem.2009，393，445～452；C.W.Klampfl，W.Buchberger，M.Turner，G.S.Fritz，J.Chromatogr.A.1998，804，349～355.)。

液相色譜－質譜聯用方法是氨基酸的重要分析方法之一。由于液相色譜在分離熱不穩定和高沸點化合物方面的優勢以及質譜超高的靈敏度和強大的鑒定能力，使得LC-MS方法成為分離分析復雜生物樣本的有效手段。使用LC-MS方法分析氨基酸還可以進一步分為兩類，一類是游離氨基酸的直接分析，主要包括離子對反相色譜－質譜方法(Ion-pair?reversed-phase?LC-MS)(參見P.Chaimbault，K.Petritis，C.Elfakir，M.Dreux，J.Chromatogr.A.1999，855，191～202.)和親水相互作用色譜－質譜方法(簡稱：HILIC-MS)(參見S.Guo，J.A.Duan，D.W.Qian，Y.P.Tang,，Y.F.Qian，D.W.Wu，S.L.Su，E.X.Shang，J.Agric.Food?Chem.2013，61，2709～2719.)；另一類是衍生化間接分析法，主要是指柱前化學衍生化結合反相色譜－質譜聯用方法(參見K.Guo，C.Ji，L.Li，Anal.Chem.2007，79，8631-8638；W.-C.Yang，H.Mirzaei，X.Liu，F.E.Regnier，Anal.Chem.2006，78，4702～4708.)。

游離氨基酸的直接分析操作簡單，所需分析時間短，前處理時引入的誤差因素較少，在分析大量、復雜的生物樣本時具有較為明顯的優勢。

親水相互作用色譜(簡稱：HILIC)是近年來色譜領域研究的熱點之一。它是一種用來改善在反相色譜中保留較差的強極性物質保留行為的色譜技術。它通過采用強極性固定性，并且結合高比例有機相/低比例水相組成的流動相來實現這一目的。而這樣的流動相組成尤其有利于提高電噴霧離子化質譜的靈敏度。采用親水相互作用色譜－質譜聯用技術分離氨基酸時，無需對樣品進行衍生化，樣品經處理后直接進樣，結合超高效液相色譜可以在二十分鐘內實現多種氨基酸的分離。由于氨基酸為兩性化合物，為了有利于其分離和改善峰形，通常需要在流動相中添加較高濃度的甲酸與甲酸銨或醋酸與醋酸銨形成的緩沖溶液，而流動相中較高濃度的緩沖鹽會抑制待測物的響應，影響了檢測靈敏度。

發明內容

針對現有技術中存在的上述問題，本發明的目的是提供鄰苯二甲酸作為流動相添加劑在氨基酸液相色譜－質譜聯用分析中的應用，以提高氨基酸的檢測靈敏度和色譜分離效果。

為實現上述發明目的，本發明采用如下技術方案：

本發明所述的鄰苯二甲酸在氨基酸分析中的應用，是指在用于氨基酸液相色譜－質譜聯用分析的流動相中添加鄰苯二甲酸，鄰苯二甲酸的添加濃度為0.005～0.1mmol/L，優選為0.08mmol/L。

作為優選方案，所述的流動相由水相和有機相組成，且水相和有機相中均含有甲酸與甲酸銨。

作為進一步優選方案，所述的水相中含有5～10mmol/L的甲酸銨和0.1V％～0.3V％的甲酸，所述的有機相中含有1～5mmol/L的甲酸銨和0.1V％～0.3V％的甲酸。