[發(fā)明專利]一種裂解組合物及其用途、試劑盒、利用該裂解組合物制備核酸的方法、核酸分析的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410522821.1
• 申請(qǐng)日: 2014-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN105462957A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王曉惠;孫冬捷;莊青青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鴻慧（上海）生物科技有限公司;上海鴻慧健康科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種裂解組合物及其用途、試劑盒、利用該裂解組合物制備核酸的方法、核酸分析的方法。

背景技術(shù)

熒光定量PCR(qPCR)，是一種基于多聚酶鏈反應(yīng)PCR(PolymeraseChainReaction)的在許多方面改進(jìn)的DNA擴(kuò)增技術(shù)。定量PCR在thermalcycler儀器中進(jìn)行時(shí)儀器通過(guò)發(fā)射特殊波長(zhǎng)的光束照亮每一個(gè)DNA樣本以及探測(cè)激發(fā)熒光團(tuán)(fluorophonre)發(fā)出的熒光。qPCR需要使用熒光探針或熒光引物，目標(biāo)DNA在即時(shí)擴(kuò)增時(shí)其變化的數(shù)量可以通過(guò)一臺(tái)實(shí)時(shí)PCR儀器同時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。另外，qPCR還可以同時(shí)擴(kuò)增一個(gè)或多個(gè)目標(biāo)DNA序列。

qPCR(quantitativePCR)在對(duì)DNA模板上要求嚴(yán)格，一般需要從生物樣品中提取純凈DNA才能進(jìn)行。常規(guī)繁瑣的提取DNA主要方法如下：(1)經(jīng)典常規(guī)的苯酚氯仿(phenol/chloroformDNAextraction)抽提法時(shí)間長(zhǎng)、抽提步驟繁瑣且毒性大，不能夠用于高通量實(shí)驗(yàn)。此外苯酚氯仿化學(xué)試劑已經(jīng)被證明是實(shí)驗(yàn)室重要的致癌物質(zhì)，長(zhǎng)期接觸將對(duì)操作人員的身體造成不可逆的傷害，對(duì)健康與安全形成較大的威脅；(2)離子交換純化柱法(Spincolumn)，用silica膜收集DNA，步驟繁瑣，多次使用離心機(jī)和換離心管，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中DNA易丟失，提取量少，且價(jià)格昂貴，并且還產(chǎn)生較多不易消除的廢料。上述2個(gè)方法都不利于高通量；(3)磁珠法(Magnetbeads，又稱玻璃珠分離法)：用磁珠提純DNA方法步驟相對(duì)簡(jiǎn)便，較少換離心管，但也多個(gè)步驟，并且需要高價(jià)值昂貴自動(dòng)化工作站特殊設(shè)備。，磁珠提純DNA方法所采用的自動(dòng)化工作站就是非常典型的高價(jià)值設(shè)備。此外，磁珠分離DNA法雖然較少換離心管，但也多個(gè)步驟，并且需要昂貴的特殊設(shè)備。這些現(xiàn)有技術(shù)需要多次更換離心管或多次清洗-收集DNA，容易導(dǎo)致樣品交叉污染。直接進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR而不需要提取DNA方法的報(bào)道非常有限的。因此，提供一種無(wú)需經(jīng)過(guò)提純核酸、能夠直接用于核酸分析的裂解組合物，試劑盒、用該裂解組合物制備核酸的方法、以及核酸分析的方法具有現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種裂解組合物及其用途、試劑盒、利用該裂解組合物制備核酸的方法以及核酸分析的方法。該裂解組合物可以快速簡(jiǎn)捷制取核酸直接用于核酸分析。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種裂解組合物，包括A或B或兩者的組合物；

所述A選自NaOH，KOH或者Ca(OH)₂；所述B為PEG。

PEG，聚乙二醇。也稱為聚(環(huán)氧乙烯)(PEO)或聚氧乙烯(POE)，是指環(huán)氧乙烷的寡聚物或聚合物。這三個(gè)名稱現(xiàn)今一般為同義詞，但歷史上聚乙二醇往往是指分子質(zhì)量低于20,000g/mol的低聚物和聚合物，PEO是指分子量超過(guò)20,000的聚合物，POE則可指任何分子質(zhì)量的聚合物。PEO以及POE根據(jù)分子量的不同，可為液體或低熔點(diǎn)液體。由于鏈長(zhǎng)的影響，不同分子量的聚乙二醇往往有不同的物理性質(zhì)(如黏度)及不同的應(yīng)用。作為優(yōu)選，PEG的分子量為100～2000。

本發(fā)明的一些實(shí)施例中，裂解組合物中所述A的濃度為0.1～200mmol/L，所述B的濃度為1～200mg/mL。

本發(fā)明的一些實(shí)施例中，裂解組合物還包括反應(yīng)終止物。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，反應(yīng)終止物可以為終止裂解反應(yīng)的物質(zhì)。作為優(yōu)選，所述反應(yīng)終止物為TurboBuffer。任何可以終止生物樣品裂解反應(yīng)的試劑均可以應(yīng)用，本發(fā)明在此不作限定。

本發(fā)明的一些實(shí)施例中，當(dāng)所述裂解組合物中包括A和B時(shí)，所述A與所述B的摩爾比為0.1～200：0.45～1.05。

本發(fā)明還提供了上述裂解組合物用于裂解生物樣品制備核酸的應(yīng)用。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述生物樣品與所述裂解組合物的質(zhì)量體積比為：1：1～1：10(以g/mL計(jì))。

本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述生物樣品包括真核生物或原核生物。

本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述真核生物包括動(dòng)物、植物、微生物。

本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述動(dòng)物包括動(dòng)物液體組織、動(dòng)物固體組織。

本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述動(dòng)物液體組織包括唾液、尿液、血液、胃液、胸積水、肺部積水、腮腺細(xì)胞、淋巴液、骨髓液、奶液、眼淚、精液、脊髓液，腦髓，羊水，關(guān)節(jié)液或鼻液中的一種或兩者以上的組合物。